虎纹蛙及泰国虎纹蛙的分子鉴定方法

摘要

为了解决虎纹蛙实际保护工作中对外形酷似的虎纹蛙和泰国虎纹蛙的鉴定，本发明提供一种虎纹蛙及泰国虎纹蛙的分子鉴定方法。该鉴定方法以PCR技术为基础，设计特异性引物进行扩增，从而达到对虎纹蛙和泰国虎纹蛙的快速鉴定，具体实现步骤为：1）提取样本DNA；2）样本DNA检测；3）PCR扩增；分别采用四对特异性引物进行扩增；4）特异扩增产物鉴别。本发明设计的四对引物涉及不同基因位置，只需通过PCR扩增即可区分虎纹蛙和泰国虎纹蛙，引物特异性强，琼脂糖凝胶电泳特征谱带稳定性高，无区域性差异，在实际应用中能够获得可靠而有益的效果。

主权项

一种中国虎纹蛙及泰国虎纹蛙的分子鉴定方法，其特征在于：该方法以PCR技术为基础，设计特异性引物进行扩增，根据扩增产物电泳条带的不同实现对中国虎纹蛙和泰国虎纹蛙的快速鉴定，包括如下步骤：1）提取样本DNA；2）样本DNA检测；3）PCR扩增；分别采用以下四对特异性引物进行扩增，HWW‑H1J/N，其上游引物具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；下游引物具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；HWW‑H2J/N，其上游引物具有如SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；下游引物具有如SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；HWW‑H3J/N，其上游引物具有如SEQ ID No.5所示的核苷酸序列；下游引物具有如SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；HWW‑H4J/N，其上游引物具有如SEQ ID No.7所示的核苷酸序列；下游引物具有如SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；4）特异扩增产物鉴别扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，120V恒压，核酸染色剂染色；在凝胶成像系统中进行观察和分析，并记录结果；当引物HWW‑H1J/N、HWW‑H2J/N、HWW‑H3J/N、HWW‑H4J/N分别扩增出1000 bp、3000 bp、3000 bp、3500 bp片段大小时，证明是中国虎纹蛙；当引物HWW‑H1J/N、HWW‑H2J/N、HWW‑H3J/N不能扩增出片段而能HWW‑H4J/N能扩增出3500 bp片段大小时，证明为泰国虎纹蛙。