一种针对FLG基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其制备

摘要

本发明涉及一种针对FLG基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其制备。实验构建了针对FLG基因的shRNA的慢病毒载体，将合成的针对ShRNA的DNA片段通过慢病毒载体介导，还与pHelper1.0、pHelper2.0两种载体共转染293T细胞培养，获得重组慢病毒载体后，转染目的细胞，实现针对FLG基因的RNA干扰。采用的自身失活的第三代慢病毒载体，具有安全可靠、可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长时程表达、免疫反应小等优点，是一种理想载体。本发明的慢病毒载体，对人正常皮肤细胞HACAT干扰效果达75-95%，因此本发明重组慢病毒载体为有关FLG基因的进一步研究奠定良好实验基础，并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究。

主权项

一种针对FLG基因RNA干扰的重组慢病毒载体，是自身失活的第三代慢病毒载体，其特征在于，所述的载体含PGLV/H1/GFP‑Sh FLG重组载体，所述的PGLV/H1/GFP‑Sh FLG重组载体是在PGLV/H1/GFP载体的多克隆位点中连接了双链DNA片段；所述的双链DNA片段的序列为以下序列中的一种：(1)FLG‑homo‑274：FLG‑homo‑274‑S：5’‑GATCCGTTGGCTCAAGCATATTATTTCAAGAGAATAATATGCTTGAGCCAACTTTTTTG‑3’FLG‑homo‑274‑AS：5’‑AATTCAAAAAAGTTGGCTCAAGCATATTATTCTCTTGAAATAATATGCTTGAGCCAACG‑3’(2)FLG‑homo‑769：FLG‑homo‑769‑S：5’‑GATCCGCACCACTGATAGTCTATTATTTCAAGAGAATAATAGACTATCAGTGGTGCTTTTTTG‑3’FLG‑homo‑769‑AS：5’‑AATTCAAAAAAGCACCACTGATAGTCTATTATTCTCTTGAAATAATAGACTATCAGTGGTGCG‑3’(3)FLG‑homo‑1627：FLG‑homo‑1627‑S：5’‑GATCCGCCACGAGCAATCGGTAAATTTCAAGAGAATTTACCGATTGCTCGTGGCTTTTTTG‑3’FLG‑homo‑1627‑AS：5’‑AATTCAAAAAAGCCACGAGCAATCGGTAAATTCTCTTGAAATTTACCGATTGCTCGTGGCG‑3’。