发明名称 |
一种高效获取猪诱导性多能干细胞的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种高效获取猪诱导性多能干细胞的方法,该方法将脂肪干细胞(ADSCs)诱导重编程为诱导性多能干细胞(iPSCs)。具体包括如下步骤:(1)将多能性因子的cDNA导入ADSCs;(2)在无饲养层体系中,使用无血清培养基培养步骤(1)得到的ADSCs;(3)出现胚胎干细胞(ESCs)样细胞克隆后,更换成添加有MEK与GSK3信号通路抑制剂的培养基继续培养,挑取细胞克隆并扩大培养;(4)鉴定细胞克隆的多能性。本发明中,ADSCs成本低且易于大量获取,重编程的速度与效率很高;无饲养层体系可以提高阳性iPSCs克隆的纯度;无血清培养基避免了血清中未明确组分与批次差异带来不稳定因素;信号通路抑制剂能够促进细胞达到充分重编程的状态,提高阳性iPSCs克隆的质量。 |
申请公布号 |
CN103667349A |
申请公布日期 |
2014.03.26 |
申请号 |
CN201310576436.0 |
申请日期 |
2013.11.15 |
申请人 |
安徽农业大学 |
发明人 |
张运海;张宇;魏超;章孝荣 |
分类号 |
C12N15/867(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/867(2006.01)I |
代理机构 |
广州三环专利代理有限公司 44202 |
代理人 |
刘孟斌 |
主权项 |
一种高效获取猪诱导性多能干细胞的方法,用于将来源于猪的脂肪干细胞(ADSCs)诱导重编程为诱导性多能干细胞(iPSCs),其特征在于,包括如下步骤:(1)将多能性因子的cDNA导入ADSCs,其中所述的多能性因子为Oct4、Sox2、Klf4、c‑Myc基因;(2)在无饲养层体系中,使用无血清培养基培养步骤(1)得到的ADSCs;(3)出现胚胎干细胞样细胞克隆后,在所述培养基中添加MEK信号通路抑制剂与GSK3信号通路抑制剂,继续培养3天,再挑取细胞克隆并扩大培养;以及(4)鉴定细胞克隆的多能性,包括检测细胞的碱性磷酸酶活性、内源多能性基因的表达、胚胎干细胞(ESCs)标记物的表达、体内分化形成畸胎瘤的能力。 |
地址 |
230036 安徽省合肥市长江西路130号 |