一种提高湖州铁线莲悬浮细胞培养物中总黄酮的方法

摘要

本发明涉及一种提高湖州铁线莲悬浮细胞培养物中总黄酮的方法。该方法包括如下步骤：（1）单细胞的获取：选择铁线莲植株叶片，消毒后研磨，过滤得到沉淀的单细胞；（2）初代培养：把单细胞加入到液体MS培养基中，培养基中抗生素和抗真菌农药，放入摇床中培养；（3）固体培养：将细胞悬浮培养液用筛网过滤，得到单细胞悬浮液，将单细胞悬浮液与固体MS培养基混合，混合液倒入培养皿中，培养皿置于培养箱中培养；（4）继代培养：挑取生长良好的单细胞团接入液体MS培养基中培养；（5）发酵培养：继代培养15±3天后，将培养物置于4-10℃冷处理8-12小时，再常规培养7±2天。该方法能将细胞培养物中的总黄酮含量提高5倍左右。

主权项

一种提高湖州铁线莲悬浮细胞培养物中总黄酮的方法，其特征在于：包括如下步骤，（1）单细胞的获取：选择生长旺盛的铁线莲植株叶片，消毒，放入研钵中，加入缓冲液，研磨，筛网过滤，取滤液，离心得到沉淀的单细胞；（2）初代培养：把单细胞加入到液体MS培养基中，培养基中另加入常规剂量的抗生素卡那霉素或氨苄霉素，再加入常规剂量的抗真菌农药代森锰锌或多菌灵或恶霉灵或甲基硫菌灵或氟喹唑，放入摇床中培养，培养条件：光照时间16h/d，光照强度1500‑2000lx，温度25℃±1℃，摇床转速120r/min；（3）固体培养：将细胞悬浮培养液用筛网过滤，滤液离心处理后弃去上清液，得到单细胞悬浮液，将单细胞悬浮液与固体MS培养基混合，混合液倒入培养皿中，混合前固体MS培养基的温度为40℃±3℃，培养皿置于培养箱中在25℃±1℃的条件下光照培养12d；（4）继代培养：挑取生长良好的单细胞团接入液体MS培养基中培养，培养条件：光照时间16h/d，光照强度1500‑2000lx，温度25℃±1℃，摇床转速120r/min；（5）发酵培养：继代培养15±3天后，将培养物置于4‑10℃冷处理8‑12小时，再常规培养7±2天。