一种CoxA16病毒株和人用CoxA16灭活疫苗

摘要

本发明提供了一种CoxA16病毒株，该病毒株分类命名为Cox病毒A16型（GX-20K-D株），保藏编号为CGMCCNo.6350。本发明具有以下明显的有益效果：1.提供了一种可用于制备人CoxA16灭活疫苗的病毒株，具有有效的免疫原性和在细胞上较好的生长复制能力。2.提供了一种使用KMB17人二倍体细胞基质制备的人CoxA16灭活疫苗的生产制备方法，该疫苗制品具有良好的免疫原性和安全性。3.提供了一种混悬吸附技术方法，以保证CoxA16灭活疫苗病毒株在KMB17细胞上的有效感染及在该基质上的良好生长。

主权项

一种含有CoxA16病毒的人用CoxA16灭活疫苗，其特征在于，所述CoxA16病毒是一种CoxA16病毒株，其于2012年7月17日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，分类命名为Cox病毒A16型GX‑20K‑D株，保藏编号为CGMCC No.6350；而且，所述的疫苗由下列成分组成：CoxA16病毒灭活纯化抗原         10μg / ml蛋白载体                        5 ug/ml氢氧化铝                        1mg / ml甘氨酸                          3mg / ml 而且其中，所述的疫苗是通过包括以下步骤的方法制备的：1）根据KMB17细胞生产检定规程，挑选生长致密的第28代KMB17细胞，弃去培养液，以0.1%胰酶消化细胞后，弃去胰酶液，以原培养液体积的4%体积DMEM悬浮细胞；2）在上述细胞悬液中加入第14代的CoxA16病毒液，接种量moi 0.02～0.1；混匀后置于37℃，适时轻轻摇动；30min后，将该混悬液转至培养瓶中，加入定量细胞生长培养液，置37℃3～4天，待细胞贴壁并完全病变后，收集收获液；3）病毒收获液按1:4000比例加入甲醛37℃ 3天灭活病毒，灭活完成的病毒液，利用超滤浓缩仪浓缩至适当体积，经Sapharose 6FF排阻层析柱纯化，其纯化产物以Lowry法测定蛋白含量，并以免疫电镜检测其灭活的病毒形态，继以SDS‑PAGE电泳检测其纯度；4）将上述灭活病毒原液过滤除菌后，以磷酸缓冲液调整稀释至10μg/ml，同时加入Al(OH)3至终浓度为1mg / ml, 甘氨酸 3mg / ml 及具有佐剂效应的蛋白载体5ug/ml，该产品即为所需的CoxA16灭活疫苗成品。