一种生产静注人免疫球蛋白的方法

摘要

发明涉及人血浆蛋白的制备方法，具体是采用压滤法分离结合层析法纯化生产静注人免疫球蛋白的方法。其特征是采用压滤机为主要分离设备，代替离心机进行静注人免疫球蛋白的生产，使分离的温度等条件容易控制，分离速度快，而且没有高速运转设备，生产安全性高；同时，采用离子交换层析法进行产品的进一步纯化，得到高纯度的静注人免疫球蛋白，使静注人免疫球蛋白的纯度达到98.5％～100％，单体和二聚体之和达到99％～99.5％，PKA≤3IU/ml，ACA≤9％，而且采用该工艺回收率高，每吨血浆能收获静注人免疫球蛋白5600克～6300克。

主权项

一种生产静注人免疫球蛋白的方法，其特征在于：以人血浆为原料，采用压滤法分离结合层析法纯化生产静注人免疫球蛋白，生产操作压力为0.05～0.3MPa，主要包括以下生产步骤： (a)从血浆中分离组分I+II+III； (b)从组分I+II+III沉淀分离组分I+III； (c)分离组分II； (d)层析法纯化； (e)病毒灭活； (f)配制静注人免疫球蛋白； 步骤(a)所述的从血浆中分离组分I+II+III，是按以下步骤进行的：从血浆中分离组分I+II+III：将冷冻血浆在不高于37℃的条件下融化，调整温度在1～4℃之间，或者把新鲜血浆直接调整温度在1～4℃之间，用pH值为4.0的醋酸缓冲液调节血浆pH值到5.8～6.2，加入浓度为95％的乙醇，使血浆中乙醇的最终浓度为20％～22％，使反应液的最终温度为‑4～‑6℃，用压滤机进行加压过滤，过滤后的清液入另一个反应罐，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分I+II+III沉淀； 步骤(b)所述的从组分I+II+III沉淀分离组分I+III，是按以下步骤进行的：从组分I+II+III沉淀分离组分I+III：将组分I+II+III沉淀溶解于4～6倍量预冷0～2℃的注射用水中，搅拌3小时以上，制冷反应液使其温度维持在0～2℃，搅拌至溶解，加入醋酸缓冲液，调节反应液pH值为5.1～5.4，向反应液加入95％的乙醇，使反应液乙醇的最终浓度为17％～19％，在加入乙醇过程中，冷却反应液，使其最终温度为‑4.5～‑5.5℃，继续搅拌1小时，用压滤机进行加压过滤，过滤后的清液入另一个反应罐，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分I+III，冷冻保存组分I+III沉淀留作他用； 步骤(c)所述的分离组分II，是按以下步骤进行的：将上步加压过滤后的上清液用1M的碳酸氢钠溶液调节溶液的pH值为7.0～7.6，加入95％的乙醇，使反应液乙醇的最终浓度为25％～28％，在加入乙醇过程中，冷却反应液，使其最终温度为‑8～‑10℃，继续搅拌1小时，静止2小时后用压滤机进行加压过滤，过滤后的清液做回收乙醇处理，过滤完成时用压缩空气将压滤机吹干，打开压滤机，收取组分II沉淀，组分II沉淀即为人免疫球蛋白的粗制品； 步骤d所述的层析法纯化，采用的是阴离子交换层析介质：二乙氨乙基交联葡聚糖凝胶装填层析柱层析，将上步获得的组分II沉淀用3～6倍量0～5℃的注射用水溶解，过滤澄清，加入3％盐酸，调节组分II溶解液pH值在6.5～6.7之间，用5％氯化钠溶液调节溶液的电导为1.30～1.50ms/m，将层析柱用pH值为6.5～6.7的0.03M磷酸盐缓冲液平衡至出液的pH值为6.5～6.7后，上样，收集流出的蛋白峰，上样结束后，用0.03M磷酸盐缓冲液冲洗凝胶上的残余蛋白，合并上述两项蛋白液称重，将调整好的蛋白液抽至清洁的反应罐中，启动超滤器，开始预浓缩，蛋白浓度按g/ml计，达到6％～8％时，加入9倍2℃注射用水进行透析，透析过程中注意补加3％Hcl适量，即得静注人免疫球蛋白原液； 步骤e所述的病毒灭活，是在透析结束后，加入麦芽糖，补加注射用水，用3％Hcl调整浓缩后蛋白液的pH值为3.9～4.4，使最终制品人免疫球蛋白含量为53～55g/L，麦芽糖含量按g/ml计为9％～11％，除菌过滤，进行低pH孵育法病毒灭活； 步骤f所述的配制：是在灭菌灭活结束后，再用纳米膜过滤法进行病毒去除处理，然后进行除菌分装既得成品静注人免疫球蛋白。