主权项 |
一种耐超高温的液化淀粉酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步聚1,琼脂培养基接种培养:(1)琼脂培养基准备:培养基配方为,胰蛋白胨1.0‑1.5%,酵母膏0.5‑0.7%,NaCl 0.9‑1.1%,琼脂1.8‑2.1%,可溶性淀粉0.25‑0.30%, pH6.5‑7.0,其余为水;将所述配料混匀后,放于培养皿中,0.09‑0.11MPa MPa灭菌30‑35min,冷却到室温,制成琼脂复壮培养基,备用;(2)接种与培养:将保存的地衣芽孢杆菌环移取1‑2环放于每个培养皿的琼脂培养基上,置于36℃±1℃恒温培养60‑70h,取出保存,制成琼脂培养基菌种;步聚2,扩大培养:(1)扩大培养基配方:胰蛋白胨1.0‑1.5%,酵母膏0.5‑0.7%,NaC1 0.9‑1.1%,可溶性淀粉0.25‑0.30%,pH6.5‑7.0,其余为水;0.09‑0.11MPa,灭菌30‑35min,冷却至39‑41℃,制成扩大培养基,备用;(2)扩大培养方法:取步聚1制成的琼脂培养基菌种,按扩大培养基重0.8%的接种量,接种到冷却至39‑41℃的扩大培养基,36℃±1℃恒温培养60‑70小时,恒温培养时,不断搅拌通风,搅拌速度为300‑320转/分钟,通风量为1.3‑1.5立方气体/升扩大培养基/分钟,制成扩大培养液;步聚3,液态发酵制备:(1)液态发酵培养基配方:(NH4)S040.22‑0.27%,KH2PO4 0.30‑0.37%,CaC120.015‑0.02%,可溶性淀粉0.25‑0.30%,胰蛋白胨0.35‑0.45%,玉米粉2.9‑3.5%,pH6.5‑7.0,其余为水;0.09‑0.11MPa MPa灭菌30‑35min,冷却至39‑41℃,制成液态发酵培养基,备用;(2)液态发酵培养:取步聚2制成的扩大培养液,按液态发酵培养基重2.5‑3.5%的接种量,接种到冷却至39‑41℃的液态发酵培养基,36℃±1℃恒温培养60‑70小时,恒温培养时,不断搅拌通风,搅拌速度为300‑350转/分钟,通风量为1.3‑1.5立方气体/升培养基/分钟,制成液态发酵液;步聚4,粗滤:往步聚3制成的液态发酵液中添加相当于液态发酵液重4‑6%的硅藻土,混合均匀,板框压滤,得粗滤液;步聚5,膜浓缩:以微滤膜将步聚4所得粗滤液过滤浓缩至原粗滤液的1/4‑1/5,在5‑25℃下保存。 |