一种油菜蜂花粉核酸提取方法

摘要

本发明涉及一种油菜蜂花粉核酸提取方法，该方法包括以下步骤：⑴配制溶剂；⑵油菜蜂花粉壁破碎处理：将油菜蜂花粉与步骤⑴所得的溶剂混合均匀并浸泡，得到花粉溶液；然后对花粉溶液进行匀质，即得花粉匀质液；⑶在花粉匀质液中加入SDS提取液，水浴后得到油菜蜂花粉细胞裂解液；⑷将油菜蜂花粉细胞裂解液冷却至室温，加入步骤⑴所得的溶剂抽提，然后离心得到上清液；⑸重复步骤⑷，直到水相和有机相中间无蛋白层；⑹水相中加入预冷的异丙醇，摇匀后放置或过夜，得到液相和沉淀物；沉淀物用乙醇洗涤，去乙醇自然风干，即得油菜蜂花粉核酸；然后用灭菌ddH2O溶解油菜蜂花粉核酸即可。本发明预处理成本低、操作简单快速且无有害物质残留。

主权项

一种油菜蜂花粉核酸提取方法，包括以下步骤：⑴配制溶剂：将SDS提取液与氯仿/异戊醇的混合液等体积混合，即得溶剂；其中氯仿/异戊醇的混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24：1；所述SDS提取液是指将100ml浓度为0.5mol/L且pH值为8.0的EDTA、100ml浓度为5mol/L 的NaCl溶液和50ml质量浓度为10%的SDS混合均匀后加双蒸水定容至500ml所得的溶液； ⑵油菜蜂花粉壁破碎处理：将油菜蜂花粉与所述步骤⑴所得的溶剂按照1：3~1：5的质量体积比混合均匀，并浸泡12~24h，得到花粉溶液；然后用匀浆机以20000~24000转/min的速度对所述花粉溶液进行匀质，匀质次数为2~3次，每次5~10min，即得花粉匀质液；⑶将所述花粉匀质液转入离心管中，加入所述花粉匀质液体积5~10倍的所述SDS提取液，于60~65℃水浴1h~1h 30min，得到油菜蜂花粉细胞裂解液；所述SDS提取液是指将100ml浓度为0.5mol/L且pH值为8.0的EDTA、100ml浓度为5mol/L 的NaCl溶液和50ml质量浓度为10%的SDS混合均匀后加双蒸水定容至500ml所得的溶液； ⑷将所述油菜蜂花粉细胞裂解液冷却至室温，加入所述步骤⑴所得的溶剂抽提8~10min，然后于0~4℃，以10000r/min的速率离心8~10min，得到上清液；⑸所述上清液转入另一离心管，重复步骤⑷，直到水相和有机相中间无蛋白层；⑹所述水相中加入其2/3体积按常规方法获得的预冷的异丙醇，摇匀后于‑20℃放置2h~3h或者过夜，得到液相和沉淀物，弃去所述液相；所述沉淀物用质量浓度为75%的乙醇洗涤2~3次，去乙醇自然风干，即得油菜蜂花粉核酸，称取其干重；然后用灭菌ddH2O溶解所述油菜蜂花粉核酸，于0~4℃保存，或于‑20℃下放置长期保存；所述油菜蜂花粉核酸与所述灭菌ddH2O的质量体积比为1：50~1：120。