一种利用管内切虫来提取单条植物线虫基因组DNA的方法

摘要

本发明提供了一种利用管内切虫来提取单条植物线虫基因组DNA的方法，所述方法的关键创新点为使用小型解剖刀在PCR管中将线虫切开，无需转管，有效地避免了管外切割线虫后转管造成的DNA损失，从而极大的提高了DNA提取的效率，而且使用本发明中的方法提取线虫DNA时无需冻融的环节，提取步骤更加简化。利用本发明中的方法提取获得的单条线虫基因组DNA模板满足常规PCR扩增、实时荧光PCR扩增、恒温扩增等分子检测技术的需求。此法高效、稳定、成本低、操作简单、安全无毒，可在基于核酸的分子检测鉴定中推广应用。

主权项

一种利用管内切虫来提取单条植物线虫基因组DNA的方法，所述方法包括如下步骤：步骤一、预处理：将待提取的线虫用双蒸水清洗干净，挑取单条线虫放入含8μL双蒸水的PCR管中，掌上离心机瞬时离心；步骤二、切割裂解：在上述PCR管内用小型解剖刀将线虫切开，随后加入2μL裂解液，所述裂解液为体积比为10：9：1的10×PCR Buffer、双蒸水与20mg/mL蛋白酶K的混合液；步骤三、后处理：将步骤二经切割裂解的线虫于56℃保温1h后，95℃加热10min，瞬时离心后上清液可用于后续的分子检测。