一种可抑制褐变产生的川贝母多倍体愈伤组织的培养方法

摘要

本发明公开了一种可抑制褐变产生的川贝母多倍体愈伤组织的培养方法，该方法通过采用将诱导产生的多倍体愈伤组织浸泡在柠檬酸溶液中切割为适当大小，再转接入由MS、活性炭和乳糖组成的培养基中进行预培养，然后将预培养后的多倍体愈伤组织接入以改良的MS为基本培养基，并添加了2,4-D、KT和二硫苏糖醇的固体培养基中进行增殖培养，有效克服了川贝母多倍体愈伤组织在增殖培养中易产生褐变的问题，提高了川贝母多倍体愈伤组织的增殖倍数，为利用生物工程技术大规模、快速生产川贝母有效组分提供了一条新途径。

主权项

一种可抑制褐变产生的川贝母多倍体愈伤组织的培养方法，其特征在于包括如下步骤：（1）川贝母多倍体愈伤组织的诱导培养：选取川贝母新鲜鳞茎的鳞片叶，先进行消毒处理，然后接入pH值为5.5～6.2的MS+6‑BA0.1～1.0mg·L‑1+2，4‑D1.0～5.0mg·L‑1+IAA0.1～1.0mg·L‑1+秋水仙素300～600mg·L‑1+蔗糖20～40g/L+琼脂5.0～6.5g/L的培养基中，在温度为12～20℃且无光照的条件下诱导培养2～5天，然后再转接到不含秋水仙素的上述培养基中，在同样的培养条件下进行培养，获得川贝母多倍体愈伤组织；（2）川贝母多倍体愈伤组织的预处理：在超净工作台上将川贝母多倍体愈伤组织从培养瓶中取出，直接浸泡于装有柠檬酸溶液的培养皿中，并在柠檬酸溶液中将其切割为1.0cm～3.0cm3的大小后，转接入pH值为5.0的MS+活性炭1.0～4.0%+乳糖20～35g/L的液体培养基中，在温度为10～15℃、无光照和摇床转速为120～140r/min的条件下预处理4～8天；（3）川贝母多倍体愈伤组织的增殖培养：将经预处理后的川贝母多倍体愈伤组织转接到pH值为5.5的改良MS+2,4‑D1.0～4.0mg/L+KT0.5～2.0mg/L+二硫苏糖醇0.1～0.3mg/L+葡萄糖20～45g/L+琼脂4.0～5.0g/L的固体培养基中，在培养温度为12～26℃、每天光照4～8小时和光照强度为500～800lx的条件下进行增殖培养，所述改良MS基本培养基为无机物和硝酸钾含量减半的MS基本培养基。