特异性抑制人SIRT1 基因表达的shRNA慢病毒表达载体及其构建方法与应用

摘要

本发明提供一种特异性抑制人SIRT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体及其构建方法与应用，该表达载体是根据人SIRT1 的mRNA全序列，应用RNAstructure4.4软件对靶mRNA的序列进行评估得到4条靶核苷酸序列，分别在这4条靶核苷酸序列两端引入相应的接头后得到相对对应的shRNA寡核苷酸序列，将shRNA寡核苷酸序列插入到所述的多克隆位点、连结至慢病毒siRNA载体pFIV-H1/U6-copGFP中。所述的多克隆位点包括BbsI酶切位点，正义及反义链的5’端分别添加了AAAG 及AAAA，与BbsI酶切后形成的粘性末端互补；本发明提供的人SIRT1基因表达的shRNA慢病毒表达载体具有转染效率高，可持续、稳定、特异地抑制人SIRT1基因的表达，可用于科学研究及制备治疗人SIRT1基因表达异常相关疾病的药物。

主权项

特异性抑制人SIRT1 基因表达的shRNA慢病毒表达载体，其特征是：至少包括靶向人SIRT1 基因的shRNA寡核苷酸序列和多克隆位点；在人SIRT1 基因的shRNA靶序列正义及反义链的5’端分别添加了AAAG  及AAAA， 与多克隆位点Bbs I酶切后形成的粘性末端互补；所述的shRNA寡核苷酸序列插入到所述的多克隆位点中连结至pFIV‑H1/U6‑copGFP表达载体。