西罗莫司粗晶的制备方法

摘要

本发明提供了一种西罗莫司粗晶的制备方法，包括吸附、萃取、洗涤浓缩、洗涤、结晶、洗晶干燥等步骤，即可得到西罗莫司粗晶，本发明不需要经过柱层析等一系列繁杂工序，而是通过简单常规的实验操作就可得到西罗莫司粗晶，操作简单，可进行工业化生产。本发明极大程度地提高了西罗莫司的纯度和含量，并提高了西罗莫司中异构体B与异构体C的比值。目前市场上未见西罗莫司以粗晶形式存在的产品，采用本发明制得的西罗莫司粗晶具有方便储存和运输的优点，大大便利了广大研发人员或生产人员。

主权项

一种西罗莫司粗晶的制备方法，该方法是先将西罗莫司发酵液过滤，接着除去上清液，得到西罗莫司菌丝体，然后用酒精提取西罗莫司菌丝体，得到西罗莫司菌丝体的浸提液；将该西罗莫司菌丝体的浸提液采用下述步骤进行操作：(1)吸附：将西罗莫司菌丝体的浸提液100L减压浓缩成浓缩物，接着浓缩物中加入固体吸附剂硅藻土0.1kg以用于吸附浓缩物中的杂质，并搅拌、静置，然后倾沥除去液体得到残余物；(2)萃取：加入5L乙酸乙酯至经过(1)处理所得的残余物中，并搅拌，然后过滤或离心除去固体，再将所得溶液静置以使溶液分为水、有机溶液两层，并除去水层以获得有机溶液；(3)洗涤浓缩：加入上述有机溶液体积的0.1倍的饱和食盐水至经过(2)处理所得有机溶液中，对有机溶液进行洗涤，并除去水层，得到剩余物；再加无水硫酸钠至上述剩余物中干燥3小时，然后过滤以获得滤液，最后将滤液减压浓缩，得黑褐色油状物；(4)洗涤：加入上述油状物体积的0.5倍的非极性溶剂石油醚至经过(3)处理所得的油状物中，并搅拌、静置，然后除去非极性溶剂以获得残留物；(5)结晶：加入上述残留物体积的0.5倍的结晶溶剂乙醚至经过(4)处理所得的残留物中，并搅拌溶解，获得西罗莫司溶液，接着将该西罗莫司溶液在室温下放置2h，然后过滤除去液体，得到西罗莫司晶体；(6)洗晶干燥：用结晶溶剂乙醚洗涤(5)中获得的西罗莫司晶体三次，然后将洗涤后的西罗莫司晶体置于45℃下减压干燥4h，得到的产品与西罗莫司标准品进行比照，确定为西罗莫司粗晶；(7)检测：采用高效液相色谱对(6)中获得的西罗莫司粗晶的纯度进行检测，其中：所述高效液相色谱的检测条件为：色谱柱：Kromasil C18柱；色谱柱规格：5μm，4.6mm×250mm；流动相：体积比为甲醇∶乙腈∶水=70∶15∶30的甲醇、乙腈和水的混合溶液；检测波长：277nm；柱温：40℃；流速：1ml/min；经高效液相色谱检测，产物的纯度达到95%，异构体B：异构体C=17：1；用西罗莫司标准品测定西罗莫司粗晶中的西罗莫司的含量为83.3%；计算收率，经测定西罗莫司的收率为72.3%。