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一种利用离体叶圆片鉴定辣椒耐热性的方法，其特征在于，该方法利用辣椒6～7叶幼苗期离体叶圆片，在人工气候箱中进行耐热性鉴定，根据创制的辣椒离体叶圆片热害分级标准统计、计算待检某一品系的群体热害指数，并根据制定的群体热害分级标准，确定待鉴定辣椒品系的耐热性，具体步骤如下：1）选择辣椒耐热品系B35为耐热对照，辣椒不耐热品系B6作为热敏对照；2）将耐热性未知的待检辣椒材料种子，以及耐热对照和热敏对照的种子，分别经55℃温水浸种15min，并不断搅动使水温降至35℃再浸种8h，捞出用清水洗净，装入干净的湿布袋中置于28℃光照培养箱，全黑暗环境进行催芽，经4d种子露白，播于穴盘中；然后将穴盘置于昼夜温光周期条件的人工气候箱进行培养，所述的昼夜温光周期条件为：相对湿度50%～70%，光照3000～4000lx，白天温度25℃～30℃，16h，夜间温度18℃，8h，培养期间浇Hoagland′s营养液；3）功能叶的采集及离体叶圆片的制作：待幼苗长至6～7片真叶时，选取辣椒子叶上方第5、6片生长正常的带柄功能叶，利用直径0.9cm的打孔器采集叶圆片作为鉴定其耐热性的样品，每个待检辣椒品系采集直径0.9cm离体叶圆片样品20片，重复3次；4）将采集的辣椒离体叶圆片按待检辣椒品系编号，浸入装有30mL、浓度为300mmol/L NaCl的带盖培养皿中，加盖后在培养皿上用记号笔标明待检辣椒品系编号；然后，将装有待测样品叶圆片的盐溶液培养皿一式两份分别置于38℃和20℃的人工气候箱中，光照20000lx，连续光照处理24h后，统计热害指数；在鉴定期间，每隔12h检查培养皿中水位并及时补加蒸馏水至30mL水位；5）按照以下辣椒离体叶圆片耐热性鉴定分级标准统计待检辣椒品系叶片级数：0级：叶圆片青绿，无热害症状；1级：叶圆片边缘轻度失绿；3级：叶圆片边缘轻度失绿，叶圆片中心呈水渍状；5级：叶圆片中部出现片状失绿症状；7级：叶圆片中部片状失绿加剧，仅叶圆片四周出现浅绿色环；9级：叶圆片中部及叶圆片边缘均失绿。6）按下式计算热害指数：热害指数=∑（高温下各级热害指数叶圆片数×该热害级别值‑常温下各级热害指数叶圆片数×该热害级别值）÷（调查总叶圆片数×最高级值）×100；热害指数计算时，如重复间差异不显著，取3次重复的平均值；如差异显著，再重复3次，取其3次差异不显著的平均值作为该检测辣椒耐热性品系的热害指数；最后，根据以下群体分级标准确定待测辣椒品系或株系的耐热性：热害指数≤35.0为耐热品系；热害指数在35.1～54.9为较耐热品系；热害指数≥55.0为热敏品系。 |
