一种高特异性聋病易感基因检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种同时检测12个聋病易感基因荧光检测试剂盒，该试剂盒可在3个小时内同时检测人最常见的四个耳聋相关基因中的12个热点突变，该试剂盒包括扩增前试剂和扩增后试剂；所述扩增前试剂包括：PCR缓冲液、MgCl2和dNTPs的反应混合物，Taq酶，超纯水，高特异性扩增各检测位点基因座的引物混合物；所述扩增后试剂包括：基因分型标准物和内标。本发明首次复合采用了荧光标记技术、LNA核苷单体掺入-引物修饰技术、毛细管电泳技术实现对耳聋基因位点高灵敏度特异性同时检测，大大节约了人力物力和时间、防止多步操作而产生污染。

主权项

一种高特异性聋病易感基因检测试剂盒，其特征在于包括DNA聚合酶及其缓冲溶液、扩增各易感基因及Amelogenin基因座的引物、内标及各基因突变位点对应的基因分型标准物，所述聋病易感基因为GJB2：176del16bp、235delC、299delAT；SLC26A4：2168A>G、IVS7‑2A>G、1174A>T、1226G>A、1975G>C、2027T>A；12SrDNA：1494C>T、1555A>G；GJB3：538C>T；所述用于GJB2235delC、176del16bp、299delAT检测的引物为：SEQ NO.1：5’‑CGCATTATGATCCTCGTTGTGG‑3’SEQ NO.2：5’‑GCTTGATGAACTTCCTCTTCTTCTC‑3’；用于12S rRNA1555A>G突变检测的引物为：SEQ NO.3：5’‑AGTGGGTTTGGGGCTAGGTTTAG‑3’SEQ NO.4：5’‑GTACGCATTTATATAGAGTAGC‑3’；用于12S rRNA1494C>T突变检测的引物为：SEQ NO.5：5’‑AGTGGGTTTGGGGCTAGGTTTA‑3’SEQ NO.6：5’‑GACACACCGCCCGTCTCT‑3’；用于IVS7‑2A>G检测的引物为：SEQ NO.7：5’‑CCAGCATTGTAATTTTTTTCCAGG‑3’SEQ NO.8：5’‑GTTTTTAACATCTTTTGTTTTATTTAG‑3’；用于SLC26A4：2168A>G突变检测的引物为：SEQ NO.9：5’‑TGTGATAGAAAAGCTGGAGCAAT‑3’SEQ NO.10：5’‑TTCTGTAGATAGAGTATAGCATCAC‑3’；用于SLC26A4：1174A>T突变检测的引物为：SEQ NO.11：5’‑AATGTACTTCCTGAAATACTCAGCGAA‑3’SEQ NO.12：5’‑ATGTACTTCCTGAAATACTCAGCGAA‑3’；用于SLC26A4：1226G>A突变检测的引物为：SEQ NO.13：5’‑AATGTACTTCCTGAAATACTCAGCGA‑3’SEQ NO.14：5’‑GTATCTCCTGGACGGCCGTGT‑3’；用于SLC26A4：1975G>C突变检测的引物为：SEQ NO.15：5’‑AGATCTGGAGGAACTTGATATCCCAA‑3’SEQ NO.16：5’‑GAAAGATATAGCTCCACAGTCAAGCAG‑3’；用于SLC26A4：2027T>A突变检测的引物为：SEQ NO.17：5’‑AGATCTGGAGGAACTTGATATCCC‑3’SEQ NO.18：5’‑GCAGAACCTTACCACCCGCT‑3’；用于GJB3：538C>T突变检测的引物为：SEQ NO.19：5’‑CGAGGCTTGTCCTTGTGCA‑3’SEQ NO.20：5’‑GTGGACTGCTACATTGCCT‑3’；其中LNA核苷以黑体字表示；用于Amelogenin基因座检测的引物为：SEQ NO.21：5’‑CCCTGGGCTCTGTAAAGAAT‑3’SEQ NO.22：5’‑GCAGAGCTTAAACTGGGAAGC‑3’；用于所述GJB2：176del16bp、235delC、299delAT；SLC26A4：2168A>G、IVS7‑2A>G、1174A>T、1226G>A、1975G>C、2027T>A；12SrDNA：1494C>T、1555A>G；GJB3：538C>T及Amelogenin基因座扩增的引物，每对引物中有一条引物的5’端进行荧光染料标记。