一种骨组织再生引导膜及其制备方法

摘要

一种骨组织再生引导膜，本发明采用去抗原的哺乳动物膜组织，具有致密层和疏松层双层结构，致密层由胶原纤维束紧密排列构成，在致密层外侧复合含有活性多肽的胶原涂层，疏松层由胶原纤维相互交错构成，并复合有成骨活性因子。所制备的引导膜既能阻止软组织长入，又能促进新骨形成，具有良好的生物相容性、亲水性和骨诱导能力，在体内可完全降解，不会产生有害物质；并具有隔离细胞长入作用和缓慢降解的特点，比现有的天然高分子聚合物制备的引导膜在体内留存时间长，能够为新骨生长提供充足的时间和空间。本发明方法简单、原料来源广泛且低廉，适合规模化的产业生产，有利于降低医疗成本，减轻患者的负担。

主权项

一种骨组织再生引导膜的制备方法，其特征在于，所述的引导膜为去抗原处理的哺乳动物膜组织，主要成分为胶原；引导膜具有致密层和疏松层双层结构，其中，致密层由胶原纤维束紧密排列构成，在致密层外侧复合有胶原涂层，胶原涂层中含有PlnDL氨基酸序列或/和RGD肽；疏松层由胶原纤维相互交错构成，疏松层内复合有成骨活性因子；具体步骤包括： 步骤一、制备去抗原膜组织 1)、原料预处理：取哺乳动物膜组织，去除表面血污及脂肪组织，用生理盐水震荡清洗至少3次； 2)、脱脂处理：将清洗后的膜组织置入质量体积比为0.1％的NaCl溶液中，震荡处理半小时后，再置入乙醚溶剂中超声处理1小时，用质量体积比为2％的NaCl溶液冲洗； 3)、致密层胰酶处理：将脱脂后的膜组织致密面朝外、疏松面朝内扎成袋状，袋内注入PBS缓冲液；将袋状的膜组织置入质量体积比为0.1％～0.4％的胰酶溶液中，震荡处理半小时，再置入0.5M的CaCl2溶液中，震荡清洗10分钟后，解开袋用水冲洗，将膜组织从封闭袋状恢复为膜状； 4)、NaOH处理：将胰酶处理后的膜组织置入浓度为0.01～0.2M的NaOH溶液中，于0～4℃条件下震荡清洗1小时，用纯水冲洗； 5)、高渗处理：将NaOH处理后的膜组织置入质量体积比为2％～5％的NaCl溶液中，震荡清洗2小时后用水冲洗；得到去抗原的天然膜组织； 步骤二、胶原纤维收缩处理：将去抗原的膜组织置入丙酮溶液中，震荡处理0.5～2小时后，用无水乙醇震荡清洗3次； 步骤三、干燥处理：将收缩处理后的膜组织平铺于医用不锈钢板表面，使致密面接触钢板，保持钢板50℃恒温干燥2～10分钟后，将膜转入‑80℃预冻至少3小时；再经低温冻干，得到具有双层结构的去抗原膜组织； 步骤四、制备含活性多肽的胶原涂层：将浓度为5～30mg/mL的pH7.2的胶原溶液均匀涂布于冻干后膜组织的致密层表面，晾干；该胶原溶液中含有5～80μg/mL的PlnDL氨基酸序列或/和0.2～2pmol/mL的RGD肽； 步骤五、疏松层复合成骨活性因子：在晾干后的膜组织疏松层表面均匀滴加含有20～100mg/mL成骨活性因子的PBS溶液，至饱和状态，经低温真空冻干后，完成制备。