一种高效CIK细胞的培养方法

摘要

本发明目的是提供一种高效的CIK细胞培养方法，本发明所制备出的CIK细胞具有增殖速度快、细胞数量大、细胞活性高、对肿瘤细胞的杀伤能力高等特点。本发明的主要特点是：利用层粘连蛋白和纤维连接蛋白包被的培养瓶对PBMC进行培养，这两种蛋白的吸附作用可以使细胞成半贴壁状态，从而利于细胞接受各种因子的刺激，并且这两种蛋白本身就有对CIK细胞增殖的促进作用；而抗CD28单克隆抗体的使用可以刺激CIK细胞中T细胞亚群的共刺激信号，促进CIK细胞的活化。到目前为止，仍未见有将层粘连蛋白、纤维连接蛋白和抗CD28单克隆抗体联合应用于CIK细胞制备的研究报道，本发明首次提供出一种在CIK细胞制备中通过添加以上三种因子提高细胞数量和杀伤活性的方法。

主权项

一种CIK细胞的培养方法，包括如下步骤：1）将层粘连蛋白和纤维连接蛋白溶解稀释后，加入到细胞培养瓶中包被；2）将外周血单核细胞PBMC接种到包被后的培养瓶中，在培养液中添加IFN‑gamma、IL‑2、抗CD3单克隆抗体和抗CD28单克隆抗体因子刺激培养细胞；3）培养到第5天，将细胞转移到透气的细胞培养袋中继续扩大培养；持续扩大培养至第15天时，完成高效CIK细胞的制备。