布氏杆菌检测试剂盒及其使用方法

摘要

本发明提供一种布氏杆菌检测试剂盒，所述的布氏杆菌检测试剂盒包括以布氏杆菌的OMP25基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。本发明的布氏杆菌检测试剂盒检测效果更全面、漏检率低。

主权项

一种布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述的布氏杆菌检测试剂盒包括以布氏杆菌的OMP25基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，所述的两对引物为外引物F3：CGTCGGCTACGACCTGAA外引物B3：ACCGGCCAGATCATAGTTCT内引物FIP：TCGTCCAAGCCGTTGTTAAGCTttttCCCGGTTATGCCGTACCT内引物BIP：GTGCCGGTCTCGAAGCCAAGttttTGTTGCCGTACTGGGTGTA或外引物F3：ATTGCCGGTTCGCAGATC外引物B3：GCGGATATCCTGCGTGTC内引物FIP：TCAGCTTGGCTTCGAGACCGttttCTTAACAACGGCTTGGACGA内引物BIP：GGCCGCGTTGAGTACCGTTAttttAGCTTGTTGCGAACAGTCG；所述的布氏杆菌检测试剂盒还包括BstDNA聚合酶、反应液、稳定液、样品预处理液、显色液和阳性对照液；所述的BstDNA聚合酶：酶浓度4‑10U/μL；所述的反应液含：1.6～2mmol/LdNTP、20～25mmol/LTris‑HCl、10～12.5mmol/LKCl、10～12.5mmol/L（NH4）2SO4、8～10mmol/LMgSO4、0.1～0.125体积％TritonX‑100、0.8～1mol/L甜菜碱；所述的样品预处理液含：10～20mmol/LpH8.0的Tris‑HCl、1～2mmol/LEDTA和1～1.2体积%TritonX‑100；所述的显色液为SYBRGreenI或EvaGreen；所述稳定液为石蜡油；所述的阳性对照液为布氏杆菌基因组DNA；所述的内引物FIP/BIP各为1.2～2.0μmol/L，外引物F3/B3的浓度各为0.2～0.25μmol/L。