一种适于规模化生产的眼镜蛇蛇毒神经生长因子的纯化方法

摘要

本发明公开了一种适于规模化生产的眼镜蛇蛇毒神经生长因子的纯化方法，是将冻干的眼镜蛇蛇毒溶解后用硫酸铵溶液进行沉淀，然后离心取上清液，采用截留分子量为3K的超滤膜膜包超滤，交换缓冲液至pH 5.0浓度为50mM的NaAc缓冲溶液，交换完缓冲液的样品上样于CM Sepharose FF柱层析，收集目的蛋白，上样于Superdex 75柱，收集目的蛋白，得到眼镜蛇蛇毒神经生长因子原液，本发明与现有技术方法相比提高了处理量和得率，适用于规模化生产。

主权项

一种适于规模化生产的眼镜蛇蛇毒神经生长因子的纯化方法，其特征在于：1）将冻干的眼镜蛇蛇毒干粉溶于水后加入硫酸铵，使其成为50~60％的硫酸铵溶液，待其充分混匀后，静置30min，10000rpm离心30min，收集上清液； 2）选用截留分子量为3KDA的超滤膜包将上清液超滤交换缓冲液为pH 5.0的50mM NaAc溶液；3）将完成缓冲液交换的上清液过0.22µm滤膜，除去杂质颗粒和细菌；4）将过膜后的上清液上样于pH 5.0 浓度为50mM 的NaAc缓冲溶液平衡好的CM Sepharose FF层析柱，流速5ml/min，上样完毕，在8倍柱体积内将缓冲液中的NaCL浓度从0升至0.5M，直线梯度洗脱；5）收集上步骤中的具有NGF活性的蛋白，用3K超滤膜膜包将蛋白溶液浓缩；6）浓缩后的目的蛋白上样于含0.15mol/L NaCL溶液，pH7.5 20mmol/L 的Tirs溶液平衡好的Superdex 75 prep grade 层析柱，流速8ml/min，收集目的蛋白，即为眼镜蛇蛇毒神经生长因子原液。