凝血酶底物和测定样本中生物活性凝血酶水平的测定法

摘要

本发明涉及凝血酶底物和测定样本中生物活性凝血酶水平的测定法。所述底物具有以下通式：A-X-Z-A’，其中A或A’之一包括发光螯合物，例如镧系元素螯合物。A或A’的另一个包括结合配对的第一配偶体，例如生物素和任选间隔基。X形成三或四肽，例如X’-Phe-Aze-Arg、X’-Phe-Pip-Arg和X’-Phe-Pro-Arg，其中X不存在或选自Lys、Ahx、Ile和Val。Z包括连接基，例如二胺连接基。

主权项

具有以下通式的凝血酶的底物：                       A‑X‑Z‑A’其中A或A’之一包括发光螯合物，以及A或A’的另一个包括结合配对的第一配偶体和任选包括间隔基，并经肽键连接至底物的剩余部分，X形成三‑或四‑肽，其选自X’‑Phe‑Aze‑Arg、X’‑Phe‑Pip‑Arg和X’‑Phe‑Pro‑Arg，其中X’不存在或选自Lys、Ahx、Ile和Val，Z为NH‑R‑Z’，其中R选自C1‑6亚烷基、C1‑6亚烷基氧基、‑S‑C1‑6亚烷基、‑S‑C1‑6亚烷基氧基、羰基‑C1‑6亚烷基、羰基‑C1‑6亚烷基氧基、C1‑6亚烷基‑羰基、C1‑6亚烷基氧基‑羰基、C1‑6亚烷基‑亚芳基、C1‑6亚烷基氧基‑亚芳基、C1‑6亚烷基‑NH、C1‑6亚烷基氧基‑NH、C1‑6亚烷基‑NHCO、C1‑6亚烷基氧基‑NHCO、C1‑6亚烷基‑CONH、C1‑6亚烷基氧基‑CONH、C1‑6亚烷基‑COS、C1‑6亚烷基氧基‑COS、C1‑6亚烷基‑CONH‑C1‑6亚烷基‑亚芳基、亚芳基、亚芳基‑C1‑6亚烷基、亚芳基‑C1‑6亚烷基氧基、R1a‑亚芳基‑(NHCO‑R2)b、R3c‑亚芳基‑(CONH‑R4)d、(R5‑CONH)e‑亚芳基‑R6f和(R7‑NHCO)g‑亚芳基‑R8h，其中各个R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8在每次出现时独立地选自C1‑6亚烷基、C1‑6亚烷基氧基、‑S‑C1‑6亚烷基、‑S‑C1‑6亚烷基氧基、羰基‑C1‑6亚烷基、羰基‑C1‑6亚烷基氧基、C1‑6亚烷基‑羰基、亚芳基或亚芳基‑C1‑6亚烷基，且各个a、b、c、d、e、f、g和h独立地选自0至6的整数，其中亚芳基为亚苯基、亚联苯基或亚萘基，其中亚苯基、亚联苯基或亚萘基任选被一个或多个取代基单‑、二‑或三‑取代，所述取代基选自卤素、OH、SH、CN、NO2、C1‑6烷基、C1‑6烷氧基或C1‑6烷氧基羰基,Z’包括N、S和羰基之一，其中，当Z’包括N时，Z’选自硫脲(‑NH‑CS‑NH‑)、氨基乙酰胺(‑NH‑CO‑CH2‑NH‑)、酰胺(‑NH‑CO‑)、甲基酰胺(‑NCH3‑CO‑)或取代的‑三嗪‑二胺(‑NH‑(R9C3N3)‑NH‑)，当Z’包括S时，Z’选自硫醚(‑S‑)、硫基乙酰胺(‑S‑CH2‑CO‑NH‑)、二硫化物(‑S‑S‑)、(‑S‑CO‑CH2‑NH‑)或(‑S‑(R9C3N3)‑NH‑)，或当Z’包括羰基时，Z’选自酰胺(‑CO‑NH‑，‑CO‑NCH3‑)或酯(‑CO‑O‑)，其中R9选自氢、卤素、C1‑6烷基、C1‑6烷硫基、C1‑6烷氧基、C1‑6硫代烷氧基、芳基氧基和氨基，其中烷基、烷硫基、烷氧基、硫代烷氧基或芳基氧基任选被一个或多个取代基单‑、二‑或三‑取代，且氨基基团任选被一个或多个取代基单‑或二‑取代，所述取代基选自卤素、OH、SH、CN、NO2、C1‑6烷基、C1‑6烷氧基或C1‑6烷氧基羰基。