一种尾巨桉胚状体诱导育苗方法

摘要

本发明涉及一种尾巨桉胚状体诱导育苗方法，属于桉树组培再生技术技术领域；具体是以尾巨桉无菌苗茎段为外植体，经胚性愈伤组织诱导、胚状体诱导及胚状体萌发可以得到完整的再生植株；采用本发明的方法可得到经胚状体发生途径再生植株，结果稳定，重复性良好，能应用于生产上大规模商品化育苗，也为尾巨桉育种奠定了基础。

主权项

一种尾巨桉胚状体诱导育苗方法，其特征在于：采用尾巨桉无菌苗茎段为外植体诱导胚性愈伤组织，经体细胞胚胎发生再生途径得到再生植株，具体方法包括以下几个步骤：（1）将尾巨桉无菌苗切成0.5~0.8 cm长不带腋芽的茎段作为外植体，经0.5 mol·L‑1蔗糖溶液于4±1℃处理8~12 h后，接种在胚性愈伤组织诱导培养基上，在25±2℃下暗培养，2周更换一次新鲜的培养基，暗培养4～5周；（2）将经胚性愈伤组织诱导培养基上培养的外植体转入胚状体诱导培养基上，在25±2℃条件下暗培养3～4周，获得胚状体；（3）将诱导获得的尾巨桉胚状体转入胚状体萌发培养基上，在25±2℃、光照强度2000～2500 lx条件下培养2～3周，获得根苗齐全的体胚萌发的尾巨桉小植株；上述胚性愈伤组织诱导培养基为：MS培养基+ 30g·L‑1蔗糖 + 7 g·L‑1琼脂 + 100 mg·L‑1 Vc+体积比为20%椰子汁+0.01 mg·L‑1苯基噻二唑基脲TDZ+ 0.1 mg·L‑1萘乙酸NAA，pH为5.8~6.0；上述胚状体诱导培养基为：MS培养基+ 30g·L‑1蔗糖 + 7 g·L‑1琼脂 + 100 mg·L‑1 Vc+1 mg·L‑1亚精胺+体积比为20%椰子汁+0.01 mg·L‑1 苯基噻二唑基脲TDZ +0.05mg·L‑1萘乙酸 NAA，pH为5.8~6.0；上述胚状体萌发培养基为：MS培养基 + 30g·L‑1蔗糖 + 7 g·L‑1琼脂 + 100 mg·L‑1 Vc+1 mg·L‑1亚精胺+体积比为20%椰子汁+0.1 mg·L‑16‑苄氨基腺嘌呤6‑BA+0.5 mg·L‑1吲哚丁酸IBA，pH为5.8~6.0。