一种DC疫苗及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及胃癌或乳腺癌的DC疫苗及其制备方法和应用，根据肿瘤抗原的氨基酸顺序构建一个重组重叠肽融合蛋白，重叠肽融合蛋白由一系列15个氨基酸组成的多肽组成，相邻二个多肽有11个氨基酸是完全重叠相同，重叠肽之间由相同的酶切位点li-key连接，所述的重组重叠肽融合蛋白的基因通过NdeI和BamH酶切位点亚克隆到pET28载体，重组重叠肽融合蛋白经大肠杆菌表达后分离纯化，从人血体外分离的PBMC与GM-CSF和重组重叠肽融合蛋白共培养，重组重叠肽融合蛋白再经DC内吞，细胞内酶切后产生一系列不确定的重叠肽，其中含有CTL表型和/或Th表型，结合到DC的MHC I和MHC II分子使DC成熟，得到所述的DC疫苗，本发明与体外用合成的每一个肽刺激DC的方法相比，刺激DC效益快且费用低。

主权项

一种DC疫苗的制备方法，其特征在于由以下步骤组成：根据肿瘤抗原的氨基酸顺序构建一个重组重叠肽融合蛋白，重叠肽融合蛋白由一系列15个氨基酸组成的多肽组成，相邻二个多肽有11个氨基酸是完全重叠相同重叠肽之间由相同的酶切位点li‑key连接，所述的重组重叠肽融合蛋白的基因通过NdeI和BamH酶切位点亚克隆到pET28载体，重组重叠肽融合蛋白经大肠杆菌表达后分离纯化，从人血体外分离的PBMC与GM‑CSF和重组重叠肽融合蛋白共培养，重组重叠肽融合蛋白再经DC内吞，经细胞内酶切后产生一系列不确定的重叠肽，其中含有CTL表型和/或Th表型，结合到DC的MHC I和MHC II分子使DC成熟，得到所述的DC疫苗。