天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的纯化方法

摘要

本发明属于一种天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的纯化方法，方法包括蚕蛹预处理，天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的初步分离纯化，天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的分离纯化的步骤。本发明能利用蚕蛹作为原料，通过分离纯化获得具有药用价值的蚕蛹中天然丝氨酸蛋白酶抑制剂，该方法操作简便，且产量高，适用于大规模生产，提纯的天然丝氨酸蛋白酶抑制剂可作为保健药物，无毒副作用。

主权项

一种天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的纯化方法，其特征在于：包括下步骤，(1)蚕蛹预处理，将新鲜蚕蛹与4℃预冷的50mM磷酸缓冲液，pH7.4，按1∶1加入到榨汁机中匀浆30秒，在冰上冰浴5分钟，继续匀浆，重复三次，使蚕蛹中的蛋白充分溶解；将匀浆转移到离心杯中，4℃，每分钟15000转，离心20分钟，取上清液，上清液过九层纱布过滤除去油脂，重复离心和过滤步骤三次；收集过滤后的上清液，4℃，每分钟15000转，离心30分钟，上清液用0.45μm滤膜真空抽滤，4℃保存；(2)天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的初步分离纯化，将上清液置于50℃恒温水浴30分钟，再置离心机每分钟15000转，离心20分钟，取上清；(3)天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的分离纯化，将上清液置于100℃恒温水浴30分钟，再置离心机每分钟15000转，离心20分钟，取上清，再重复该步骤数次，直至100℃恒温水浴无沉淀析出，即可得到天然丝氨酸蛋白酶抑制剂。