一种石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗的转瓶生产方法

摘要

本发明公开了一种石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗的转瓶生产方法。它包括细胞的转瓶培养、病毒的扩增和收获和病毒灭活。应用本发明的石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗的转瓶生产方法可以大规模的生产石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗，由于是工业流程化生产，其生产成本低、劳动强度小，生产出来的石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗经过疫苗检验，从细胞水平和鱼体水平证明该石斑鱼虹彩病毒灭活疫苗是安全的，疫苗效力检测证明，本发明的石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗的相对保护率为87.0%~95.7%，说明此石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗对受免石斑鱼提供了显著的保护，具有良好的免疫保护效力，且批间质量稳定。

主权项

一种石斑鱼虹彩病毒（SGIV）灭活疫苗的转瓶生产方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）细胞的转瓶培养：将石斑鱼脾组织细胞接入转瓶中，加入细胞生长液，充分摇匀后置于转瓶机上培养，培养温度为28℃，转速为16~20转/小时，所述的细胞生长液为：含体积分数8~10%的胎牛血清、质量分数0.266%NaCl和5mM HEPES的L15培养基；（2）病毒的扩增和收获：转瓶培养石斑鱼脾组织细胞直至长满单层，接种0.01MOI的石斑鱼虹彩病毒于对数生长期的石斑鱼脾组织细胞中，于28℃培养，转瓶机转速设置为16~20转/小时，培养2~3小时以吸附病毒，随后将转瓶机转速设为3~5转/小时，以扩增病毒，观察病毒病变效应，直至细胞病变完全，然后反复冻融2~3次；（3）将冻融后的病毒液中的病毒灭活后获得石斑鱼虹彩病毒灭活疫苗。