石房蛤毒素人工抗原和抗体及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种石房蛤毒素人工抗原和抗体及其制备方法和应用，是采用碳化二亚胺法，将石房蛤毒素STX上的氨基与载体蛋白卵清白蛋白OVA上的羧基相连，采用梯度法透析后得到高纯度的石房蛤毒素免疫抗原STX-OVA。将获得的人工抗原去制备石房蛤毒素的多克隆抗体，而制备的多克隆抗体可用于制备石房蛤毒素的酶联免疫检测试剂盒。本发明成功合成了石房蛤毒素人工抗原STX-OVA和STX-BSA，将制备的免疫抗原免疫BALB/c小鼠，可得到效价高、特异性强的多克隆抗体，利用建立的酶联免疫分析方法制备的试剂盒可用于石房蛤毒素的快速检测。

主权项

1.一种结构式为的石房蛤毒素人工抗原STX-OVA的制备方法，包括以下步骤：（1）将石房蛤毒素STX溶于二甲基亚砜DMSO中，配成0.1μg/μL的STX母液；将水溶性碳化二亚胺EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS用0.01M pH7.5磷酸盐缓冲液PBS，分别配制成1mg/mL相应工作液；（2）取100μL STX母液，加入20μL EDC工作液和12μL NHS工作液，室温震荡反应3h制成最初反应液；（3）用0.01M pH7.5的PBS缓冲液将卵清白蛋白配成1mg/mL的卵清白蛋白工作液；（4）将步骤（2）中的最初反应液加入到100μL卵清白蛋白工作液中，震荡反应12h获得最终反应液；（5）将上述的最终反应液转移到透析卡中，用300mL0.01M pH7.5的PBS缓冲液和DMSO的混合液透析72h，每12h换液1次，透析完后取出反应物即制得石房蛤毒素人工抗原；所述的透析是采用梯度透析法，第一次透析的溶液中PBS缓冲液和DMSO的体积比为100：4-5，第二次透析的体积比为100：3-4，第三次透析的体积比为100：2-3，第四次透析的体积比为100：1-2，第五次透析的体积比为100：0.5-1，以后透析的溶液不加DMSO。