一种对目标区域进行测序的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及基因工程领域，提供了一种对目标区域进行测序的方法及试剂盒，该方法包括以下步骤：A.利用特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库；B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物；C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息。该方法及其相应的试剂盒利用高通量测序技术对多个目标区域同时进行区域测序，能准确得出这些区域的序列信息，包括已知突变和未知突变位点的变异情况，检测灵敏度高，并能进一步同时对大量样品进行检测。

主权项

一种对目标区域进行测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.利用特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，并基于扩增产物构建测序文库；B.对测序文库进行单分子扩增，得到与所述多个目标区域对应的多个单分子扩增产物；C.同时对所述多个单分子扩增产物进行高通量基因测序，得到所述多个目标区域的序列信息；所述步骤A包括以下步骤：A1.利用特异性引物，对待测样品中的多个目标区域进行扩增，得到与所述多个目标区域对应的扩增产物；A2.利用接头元件，与所述多个目标区域对应的扩增产物进行连接，得到测序文库；所述接头元件包括至少一个分叉接头；所述分叉接头是双链核酸分子，包括配对区和分叉区；所述分叉区的两条单链各包含至少一个引物结合位点；所述配对区包括至少一个限制性内切酶识别位点，所述配对区的3’末端为平末端或突出末端；所述配对区的3’末端为平末端时，平末端最后一个核苷酸为带有双脱氧碱基的核苷酸；所述接头元件中的至少一个接头包含有第一标签序列，用于在文库构建过程中，对不同待测样品的测序文库进行标记；每个目标区域对应的特异性引物中，至少有一条引物与该目标区域部分互补，该部分互补的引物的5’端包含有第二标签序列，用于在扩增目标区域过程中，对不同待测样品的目标区域扩增产物进行标记。