基于Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒的电化学免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种基于Au-PB-SiO2复合纳米颗粒的电化学免疫检测方法。该检测方法采用双抗体夹心法，使固载在电极表面的神经元特异性烯醇化酶抗体与样品溶液中的神经元特异性烯醇化酶发生免疫反应，再和Au-PB-SiO2复合纳米颗粒与神经元特异性烯醇化酶抗体共耦合物结合。基于Au-PB-SiO2复合纳米颗粒的电化学活性，测得的循环伏安还原峰峰电流值与神经元特异性烯醇化酶浓度呈正相关，进而检测待测样品中神经元特异性烯醇化酶的浓度。本发明提供的电化学免疫检测方法线性相应范围为0.25～500ng/mL，检测下限为0.08ng/mL，特异性好，灵敏度高，对小细胞肺癌(SCLC)的诊断具有重要意义。

主权项

一种电化学免疫检测方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤1：制备Au‑PB‑SiO2复合纳米颗粒与待检蛋白抗体共耦合物，其中，所述Au‑PB‑SiO2复合纳米颗粒按照以下方法制备：将正硅酸乙酯加入乙醇和双蒸水的混合溶液中，超声处理后，加氨水溶液，制得含有SiO2纳米颗粒的溶液；将FeSO4和K3Fe(CN)6加入到所述含有SiO2纳米颗粒的溶液中，制得PB‑SiO2纳米颗粒；向所述PB‑SiO2纳米颗粒中加入N‑(β‑氨乙基)‑氨丙基三乙氧基硅烷溶液使所述PB‑SiO2纳米颗粒表面氨基化，再加入金纳米颗粒溶液，制得Au‑PB‑SiO2复合纳米颗粒； 步骤2：将玻碳电极预处理，置待检蛋白抗体溶液中充分结合，封闭以除去非特异性结合位点，制得免疫电极；将所述免疫电极与含有不同浓度待检蛋白的标准品充分结合，除去非特异性结合位点，置于所述Au‑PB‑SiO2复合纳米颗粒与待检蛋白抗体共耦合物中充分结合，制得工作电极；在缓冲液中采用线性扫描伏安法进行电化学检测，以工作电极和免疫电极的响应电流值之差和标准品中待检蛋白的浓度绘制标准曲线；所述玻碳电极预处理包括将所述玻碳电极抛光成镜面，超声处理后置于氯金酸溶液中，恒电位沉积；步骤3：如步骤2，将所述免疫电极与待检样品混合温育，进行电化学检测，测得待测样品的电化学峰峰电流强度，从所述标准曲线上读取对应的待检蛋白的浓度。