一种铁皮石斛无激素组织培养的方法

摘要

本发明公开一种铁皮石斛无激素组织培养的方法，该方法包括铁皮石斛种子萌发为圆球茎，圆球茎的生长，增殖分化，茎段的生根、壮苗四个组织培养阶段，这四个阶段所用的培养基依次为：无激素的MS培养基、无激素的MS基本培养基+土豆泥15～20g/l培养基、无激素的MS基本培养基+香蕉泥15～20g/l+土豆泥15～20g/l培养基和无激素的1/2MS基本培养基+香蕉泥15～20g/l+土豆泥15～20g/l培养基。本发明无激素培养和有激素培养得到的铁皮石斛培养物多糖和总生物碱含量增加，铁皮石斛的生长状况正常，保护了植物品种的遗传多样性，本发明使得铁皮石斛的组织培养更加方便、绿色环保，节约资源。

主权项

一种铁皮石斛无激素组织培养的方法，其特征在于：该方法包括铁皮石斛种子萌发为圆球茎，圆球茎的生长，增殖分化，茎段的生根、壮苗四个组织培养阶段，这四个阶段所用的培养基依次为：无激素的MS培养基、无激素的MS基本培养基+土豆泥15～20g/l培养基、无激素的MS基本培养基+香蕉泥15～20g/l＋土豆泥15～20g/l培养基和无激素的1/2 MS基本培养基+香蕉泥15～20g/l +土豆泥15～20g/l培养基；所述的无激素的MS基本培养基以及无激素的1/2 MS基本培养基用水均为普通自来水；    并且该组织培养方法具体包括以下步骤：a)将成熟铁皮石斛种子经过消毒处理，播入无激素的MS基本培养基中培养25~30天种胚膨大、萌发形成绿色的圆球茎；培养条件：培养温度23~27℃，光照度1500~2000 lx，光照时间12h/d； b)将圆球茎转入无激素的MS培养基+土豆泥15～20g/l培养基中，培养25～30天，圆球茎重叠堆积在无激素培养基中，并有叶原基和分化苗出现；培养条件：培养温度23~27℃，光照度1500~2000 lx，光照时间12h/d； c)将圆球茎分化苗转入无激素的MS基本培养基+香蕉泥15～20g/l＋土豆泥15～20g/l培养基中，诱导20~30天后有叶原基和高度达到1~2 cm小苗出现，继代培养30天成为中苗；培养条件：培养温度23~27 ℃，光照度1500~2000 lx，光照时间12h/d； d)将中苗转入1/2 MS基本培养基+香蕉泥15～20g/l +土豆泥15～20g/l的无激素培养基中，25～30天培育出5cm高以上的大苗并炼苗移栽，炼苗时保证75%～80%的含水量；培养条件：培养温度23～27℃，光照度1500~2000 lx，光照时间12 h/d；以上四种培养基pH 5.6~5.8，均含30g/l蔗糖，6g/l琼脂；土豆泥和香蕉泥均为新鲜土豆和新鲜香蕉的捣碎获得。