一种酶活和热稳定性提高的谷氨酰胺转胺酶突变体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种酶活和热稳定性提高的谷氨酰胺转胺酶突变体，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示。本发明还公开了上述突变体的构建方法，1）通过PCR或化学全合成的方法获得Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062，得到谷氨酰胺转胺酶基因序列及其上下游序列，序列如Genbank：EU477523所示，克隆到表达载体；2）通过缺失突变获得Del1-4谷氨酰胺转胺酶突变体；3）以在步骤2）获得的突变体基础上，通过定点突变对E62进行突变，获得突变体Del1-4/E62D谷氨酰胺转胺酶突变体；4）在步骤3）获得的突变体基础上，融合tag1获得如SEQ ID NO.1所示的谷氨酰胺转胺酶突变体。本发明提供的突变体在48h胞外积累量最高，酶活可达14.8U/mL，与野生酶相比提高49%，生产强度也由0.21U/ml/h增加到0.31U/ml/h。

主权项

一种酶活和热稳定性提高的谷氨酰胺转胺酶突变体，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。