一种促进羽衣甘蓝顽固基因型小孢子胚胎发生的方法

摘要

本发明公开了一种促进羽衣甘蓝顽固基因型小孢子胚胎发生的方法，将油菜无菌花药与羽衣甘蓝小孢子混合悬浮液共同培养，培养得到的胚状体在初期即可确定是羽衣甘蓝的胚状体，因为羽衣甘蓝小孢子是游离状态的，而油菜小孢子在花药中，因此在再生植株移栽时不需要对小孢子植株群体的油菜植株进行区别鉴定，从而减少了工作量，从而提高羽衣甘蓝顽固基因型小孢子出胚效率。

主权项

一种促进羽衣甘蓝顽固基因型小孢子胚胎发生的方法，其特征在于主要包括以下步骤：（1）选取羽衣甘蓝和油菜处于单核晚期至双核早期阶段的花蕾，灭菌；（2）将12～15个无菌羽衣甘蓝花蕾置于无菌烧杯中，加入10ml NLN‑13液体培养基，经研磨、过滤、离心、弃上清液后得到沉淀，然后依次加入40ml NLN‑13液体培养基和0.5ml活性炭混合液配成小孢子悬浮液，分装到10个直径为60mm的塑料或玻璃无菌培养皿中，每培养皿4ml；（3）剥取无菌油菜花蕾，取出完整花药加入到上述培养皿中，油菜花药与羽衣甘蓝花蕾数量比为5:1～10:1，加盖后封口；（4）将上述培养皿置于33℃生化培养箱中，黑暗条件培养2～3天；然后取出放置在25℃恒温培养箱中，黑暗条件下培养10～15天至肉眼可见细胞团出现，再在25℃黑暗下50～60rpm振荡培养10～15天，至子叶型胚状体形成并成熟；（5）无菌条件下，将成熟的子叶型胚状体转接至胚状体分化培养基中，每天14小时光照、23±2℃条件下培养15～20天至形成愈伤组织或直至分化出芽；再按大小将愈伤组织切成2～4块置于相同培养基与光照、温度条件下培养，至分化形成再生植株；（6）切取上述再生植株转接到生根培养基上培养；将根系生长健壮的植株炼苗后移栽到田间，经倍性鉴定后，获得的纯合双单倍体再生植株用于育种。