一种酮还原酶基因及其应用

摘要

本发明公开了一种酮还原酶基因及其应用。本发明酮还原酶基因，序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的酮还原酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。一种生产酮还原酶的基因工程菌，其中包含本发明所述的酮还原酶基因。一种酮还原酶的制备方法，包括如下步骤：培养本发明生产酮还原酶的基因工程菌，获得重组表达的酮还原酶。以该重组表达制备的酮还原酶为催化剂，不对称还原酮类化合物制备光学活性手性醇，底物转化率达96.8%，还原产物的ee大于99%。

主权项

一种酮还原酶基因，其特征在于序列如SEQ ID NO.1 所示。2. 权利要求1所述的酮还原酶基因编码的酮还原酶，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.2 所示。3. 含有权利要求1所述的酮还原酶基因的重组表达载体。4. 一种生产酮还原酶的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌中包含权利要求1所述的酮还原酶基因。5. 根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌的宿主细胞为大肠埃希氏菌（Escherichia coli）。6. 根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌的宿主细胞为大肠埃希氏菌BL21(DE3) 或大肠埃希氏菌MC1061。7. 根据权利要求5所述的基因工程菌，其特征在于所述基因工程菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2012年8月29日，保藏编号为CCTCC M 2012319的基因工程菌BL21（DE3）KRED06 。8. 一种酮还原酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：培养权利要求4所述的基因工程菌，获得重组表达的酮还原酶。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于所述的培养包括摇瓶培养或发酵罐培养。10. 根据权利要求9所述的制备方法，其中所述发酵罐培养的发酵条件是：DO 30%以上，空气流量1:1.5 vvm，葡萄糖残余量1% 以下。 11. 权利要求1所述的酮还原酶基因在不对称还原酮类化合物中的应用，其特征在于通过基因工程手段构建含有权利要求1所述的酮还原酶基因的基因工程菌，表达制备酮还原酶，以所得的酮还原酶为催化剂，不对称还原5R‑6‑氰基‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯，以制备光学活性手性醇。12. 权利要求2所述的酮还原酶作为催化剂在不对称还原5R‑6‑氰基‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯中的应用。13. 根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述的应用按下述方法进行：在pH 7.0的磷酸盐缓冲液中，在NADP+、葡萄糖脱氢酶、葡萄糖的存在下，在权利要求2所述的酮还原酶作用下，不对称还原5R‑6‑氰基‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯，制得光学手性醇。