结合非特异性扩增和多点RTQ-PCR的食品微生物检测方法

摘要

本发明提供了一种结合非特异性扩增和多点RTQ-PCR的食品微生物检测方法，其将非特异性扩增培养、多点实时定量采样及特异性实时定量PCR鉴定技术结合起来，并根据PCR结果进行数据分析，其中非特异性扩增培养提供了多种微生物的扩增条件，特异性PCR把握了测定特异性，因此无需对特定菌微生物做进一步的选择性培养；多点实时采样和特异性定量PCR结合可测定微生物初始浓度及增长过程，并提供活性与死亡微生物的比例，因此能精确的在短时间内判断出食品污染程度、活菌比例、污染微生物活性状况及污染历史，为进一步毒素测定提供指导作用；此外还可同时测定同一样品存的多种微生物，使食品微生物检测实现了高通量化；本发明还提供了根据上述方法获得的检测试剂盒，为生产实际的应用提供了极大方便。

主权项

一种结合非特异性扩增和多点RTQ‑PCR的食品微生物检测方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）非特异性扩增步骤：将疑似含有目标微生物的样品通过无选择性的非特异性培养进行微生物扩增；（2）实时定量采样步骤：在（1）中所述非特异性扩增过程中在若干个不同培养时间点进行实时定量取样，该取样时的培养时间点包括培养阶段的零时刻和微生物增长阶段内的至少一个非零时刻；（3）特异性实时定量PCR鉴定步骤：对（2）中实时定量采样所得样品进行DNA提取后，对提取出的DNA进行特异性实时定量PCR鉴定分析；和（4）根据特异性实时定量PCR鉴定分析所得Ct值进行数据处理并分析结果的步骤。