整合质粒pOPHI及无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌

摘要

本发明公开了一种整合质粒pOPHI及无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌，所述整合质粒pOPHI包括启动子，发光所需酶基因（LuxCDABE），整合酶基因（Int）和抗性筛选基因的融合基因，位于融合基因两端的同向重复序列DifR和DifL，以及噬菌体整合位点(attP)和复制子。整合质粒pOPHI转入分枝杆菌后，经过传代培养筛选出抗性基因和整合酶基因均丢失的发光菌即为无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌。构建得到的无抗性筛选标记的自主发光分枝杆菌可通过细菌的发光与否来判断其死活，可用于多种实验检测，能快速得到可信的实验数据。

主权项

整合质粒pOPHI，其包括：启动子，发光所需酶基因LuxCDABE，整合酶基因Int和抗性筛选基因的融合基因，位于融合基因两端的同向重复序列DifR和DifL，以及噬菌体整合位点attP和复制子； 所述表达质粒中各元件的排序顺序为：以启动子为起点，按顺时针方向依次含有发光所需酶基因LuxCDABE、整合酶基因Int和抗性筛选基因的融合基因，位于融合基因两端的同向重复序列DifR和DifL，以及噬菌体整合位点attP和复制子；所述DifR和DifL的序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。