| 摘要 |
1. Способ получения терапевтического агента для предотвращения заболевания и лечения клещевого энцефалита людей, при котором получают аптамеры, третичная структура которых имеет стерическое соответствие и способна образовывать прочный комплекс с третичной структурой поверхностного белка вируса, отличающийся тем, что в качестве белкового компонента комплекса используют фрагмент поверхностного белка Е вируса клещевого энцефалита, соответствующий аминокислотным остаткам 50-250 белка, ген которого амплифицируют и клонируют в плазмидном векторе, клонированный рекомбинантный белок экспрессируют, полученный рекомбинантный белок очищают и иммобилизуют на планшете, далее из первоначального пула олигонуклеотидов с помощью 15 циклов экспоненциального обогащения, SELEX, проводят отбор специфично связывающихся с вирусным белком аптамеров, при этом на каждом этапе сорбции проводят денатурацию 25 рМ одноцепочечного олигонуклеотида, далее денатурированный пул аптамеров наносят в лунку с иммобилизованным белком, инкубируют и отмывают от несвязавшихся олигонуклеотидов, связанные с белком аптамеры снимают с поверхности буфером с низкой ионной силой и высоким рН, при этом, пул аптамеров, после каждого этапа сорбции, амплифицируют, полученные ампликоны двуцепочечной библиотеки аптамеров очищают и проводят реакцию ассиметричной полимеразной цепной реакции (ПЦР) для получения одноцепочечного продукта, который очищают с помощью сорбции с получением целевого продукта.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный фрагмент гена белка Е амплифицируют с праймерами состава 5'-GACTCCATCCATATGGAGAATCCTGCC-3' и 5'-TACACGTCCTCGAGCACGGCGTG-3', затем полу� |
