采用反转录环介导等温扩增技术检测烟草病毒的方法

摘要

本发明涉及采用反转录环介导等温扩增技术检测烟草病毒的方法，其中该方法包括烟草病毒总RNA提取，RT-LAMP反应和电泳检测，确定病毒种类，其中烟草病毒选自黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、烟草蚀纹病毒(TEV)、烟草花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)中的2种或2种以上。本发明根据烟草病毒的外壳蛋白基因保守区设计了LAMP引物，采用一步法反转录环介导等温扩增技术建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测烟草多种主要病毒的方法。为烟草病毒的快速检测提供了新的手段。

主权项

一种采用反转录环介导等温扩增技术检测多种烟草病毒的方法，其中该方法包括烟草病毒总RNA提取，RT‑LAMP反应和电泳检测，确定病毒种类，其中烟草病毒选自黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、烟草蚀纹病毒(TEV)、烟草花叶病毒(TMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)中的2种或2种以上，其中RT‑LAMP反应采用的引物是包含如下5组引物SEQ ID NO.1‑20的引物组：第1组引物，用于CMV病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.1：5’‑TCTACCGTGTGGGTGACA‑3’；SEQ ID NO.2：5’‑GAGCACGGCGTACTTTCG‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.3：5’‑CCGTCCGCGAACATAGCAGAG‑GTCCGTAAAGTTCCTGCCTC‑3’；SEQ ID NO.4：5’‑GCTGCATCTGGAGTCCAAGCC‑TGTCGCCAATATCAGCGC‑3’；第2组引物，用于PVY病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.5：5’‑CGCGCTATGCCTTTGACTT‑3’；SEQ ID NO.6：5’‑TTGGAGAGACATCCTCGGT‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.7：5’‑CAATGCTGCGGCCTTCATTTGA‑GGTCACATCACGAACACCAG‑3’；SEQ ID NO.8：5’‑TCAGCCCAACCTCGACTTTTCG‑GCCTCTCTGTGTTCTCCTCT‑3’；第3组引物，用于TEV病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.9：5’‑AAAACGCGCAGCCAACAT‑3’；SEQ ID NO.10：5’‑CGTACTGCAGCAGCTTTCA‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.11：5’‑GGCATGTATGGTCGTTCCCTGT‑GACACACTTCAGTGACCTGG‑3’；SEQ ID NO.12：5’‑TTGTCACGCTATGCGTTCGACT‑TTGCATATGCGCCTCCCT‑3’；第4组引物，用于TMV病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.13：5’‑GGAAACCTTCACCACAAGT‑3’；SEQ ID NO.14：5’‑TATAGCGCTCCTTATGGC‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.15：5’‑GCTGTGACTAACGGATCTAATACCG‑AGGTTCCCTGACAGTGAC‑3’；SEQ ID NO.16：5’‑GAAGTTGAAAATCAGGCGAACCC‑TGCGTCGTCTACTCTACG‑3’；第5组引物，用于TVBMV病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.17：5’‑AACGGAATGTGGGTCATG‑3’；SEQ ID NO.18：5’‑TGTCATGTCAGTCAAATTGC‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.19：5’‑TGTTGGTTTGGCATGTTCCA‑GATGGTGATGAACAGGTTG‑3’；SEQ ID NO.20：5’‑TAGACAAATCATGGCACACTTTAGC‑GGCATATACGGTTTCTCTGC‑3’。