一种采用篮式反应器发酵制备猪圆环病毒的方法

摘要

本发明公开了一种采用篮式反应器发酵制备猪圆环病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)宿主细胞种的制备；(2)篮式反应器接种前的准备；(3)宿主细胞扩大培养；(4)病毒增殖培养：将所述反应器内的细胞生长液排空，补充与排出的细胞生长液等体积的细胞维持液后，接种猪圆环病毒，接毒后36~48h，进行第一次收取病毒液，在收获病毒液后，再向反应器内加入与已收取的病毒液等体积的细胞维持液，对病毒再次进行繁殖复制并收获，如此循环反复多次，直至检测到要收获的病毒液中的细胞耗糖量降至0.5g/L/天以下时，收获本批次最后一次猪圆环病毒液。该方法简单易行，能够极大的降低生产成本，明显提高猪圆环病毒抗原的单位毒价，增大每批次发酵的病毒液抗原收获量。

主权项

一种采用篮式反应器发酵制备猪圆环病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 宿主细胞种的制备采用常规细胞培养方法培养宿主细胞；(2) 篮式反应器接种前的准备在篮式反应器的载体篮内装入篮式反应器专用的Fibra Disk载体，加入PBS溶液，使载体能够全部浸泡在该PBS溶液中，做灭菌处理；(3) 宿主细胞扩大培养在向所述反应器内接种步骤(1)所得宿主细胞前，排出反应器内的PBS溶液，加入细胞生长液，先按宿主细胞扩大培养的条件设定好篮式反应器的各项参数，其中，温度37℃、溶解氧50%~80% 、pH7.0~7.3和搅拌速率50~100转/分钟，直到各参数稳定后，再将步骤(1)所得宿主细胞接种至篮式反应器内，让宿主细胞在浸泡于细胞生长液中的Fibra Disk载体上吸附生长，当培养至细胞耗糖量稳定时，接种病毒；所述细胞生长液采用包括以下体积分数的组分组成的培养液：RPMI‑1640培养基液93%~97%，牛血清3%~7%；(4) 病毒增殖培养将所述反应器内的细胞生长液排空，补充与排出的细胞生长液等体积的细胞维持液后，接种猪圆环病毒，在以下条件下培养：pH7.2~7.5，溶解氧50%~80%，搅拌桨转速60~90转/分钟，温度33℃~37℃，接毒后36~48h，进行第一次收取病毒液，在收获病毒液后，再向反应器内加入与已收取的病毒液等体积的细胞维持液，对病毒再次进行繁殖复制并收获，如此循环反复多次，直至检测到要收获的病毒液中的细胞耗糖量降至0.5g/L/天以下时，收获本批次最后一次猪圆环病毒液；所述细胞维持液包括RPMI‑1640培养基液和牛血清混合构成，其中，RPMI‑1640培养基液的体积分数为98%~99.5%，牛血清的体积分数为0.5%~2%。