荧光定量RT-PCR检测鸭源性冠状病毒的引物、探针及试剂盒

摘要

本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测鸭源性冠状病毒的引物、探针及试剂盒。其上下引物及探针的核苷酸序列依次为：5'-AGGTAGTGGTGTTCCTGATAATGAG-3’、5'-ACGCATCTGGGACTGGTTTTC-3'、5'-CCTGGCTTATACCTGGCTTGGCGTCT-3'；并建立起含有上述引物、探针的荧光定量RT-PCR检测鸭源性冠状病毒的试剂盒。该试剂盒特异性强，灵敏度高，定量准确，操作简便，用时短，效率高，成本低，可对大量的样品进行检测，能够在短时间内为IB的治疗及预防提供依据；与常规的PCR检测相比，能有效地避免假阳性出现，同时也降低了病毒的检出量，更为灵敏。

主权项

1.一种荧光定量RT-PCR检测鸭源性冠状病毒的试剂盒，其特征在于，以单样份计量，含有如下荧光定量RT-PCR反应体系：无RNA酶ddH₂O 17.75μL、25μmol/L的dNTP 混合液1μL、10×PCR 含Mg²⁺ 缓冲液2.5μL、10μmol/L的上游引物 0.25μL、10μmol/L的下游引物0.25μL、10μmol/L的探针引物0.5μL、5U/μL的 rTaq 0.25μL，且检测时使加入待测样液后的RT-PCR反应体系总体积为25μL；所述上、下游引物及探针的核苷酸序列如下：上游引物：5'-AGGTAGTGGTGTTCCTGATAATGAG-3’，下游引物：5'-ACGCATCTGGGACTGGTTTTC-3'，探针引物：5'-CCTGGCTTATACCTGGCTTGGCGTCT-3'；以所述试剂盒对待测样液进行TaqMan荧光定量RT-PCR扩增时的反应条件为：94℃  30s，94℃  10s60℃  1min           40次循环。