核酸检测

摘要

本发明提供用于从样品的核酸总体中富集和/或检测包含至少一个变异核苷酸的核酸的方法和试剂盒。所述方法利用富集引物和桥探针来富集和检测目标核酸。富集引物的延伸允许包含所述变异核苷酸的目标核酸的扩增。

主权项

一种用于从样品的核酸总体中，富集和/或检测包含至少一个变异的核苷酸的目标核酸的方法，所述方法包括：(a)用所述目标核酸序列第一链的富集引物和扩增引物处理所述样品，以形成双链体的混合物，其中所述双链体的混合物包括在杂交条件下与所述目标核酸模板退火的所述富集引物，其中所述富集引物的核苷酸序列能与所怀疑的变异核苷酸所处的诊断区域互补，其中所述富集引物包含至少一个令所述富集引物的延伸产物不适合指数扩增的化学基团部分，富集引物3’末端核苷酸与底物正常核苷酸互补，从而与怀疑的变异核苷酸不互补，这样使得富集引物当与底物含有变异核苷酸杂交时是不能延伸，当与底物含有正常核苷酸杂交时能延伸；并且其中所述扩增引物能以令所述扩增引物的3’端与所述富集引物的5’端紧邻或位于所述富集引物5’端上游的方式，与所述目标核酸退火；(b)将上述步骤(a)的混合物置于包含适当的核苷三磷酸和核酸聚合酶的延伸条件，以延伸可被延伸的退火的引物，从而合成引物延伸产物，其中所述富集引物的延伸允许包含所述变异核苷酸的所述目标核酸的扩增，其中当所述富集引物与包含所怀疑的变异核苷酸的所述诊断区域退火时，退火的富集引物不能被延伸，所述富集引物由此在延伸条件下与所述目标序列解离，从而允许所述扩增引物的延伸通过包含所怀疑的变异核苷酸的所述诊断区域，其中当所述富集引物与包含相应的正常核苷酸的所述诊断区域退火时，退火的富集引物得到延伸以合成所述富集引物的延伸产物，所述扩增引物的延伸由此被所述富集引物的延伸产物所阻碍。