发明名称 Células y metodología para generar virus de ARN de cadena de sentido negativo no segmentada
摘要 Una célula que produce de forma estable a partir de ácido o ácidos nucleicos integrados en su genoma al menosuna ARN polimerasa, una nucleoproteína (N) de un virus de ARN de cadena de sentido negativo no segmentada yuna fosfoproteína (P) de un virus de ARN de cadena de sentido negativo no segmentada o derivados funcionales delos mismos, en el que dicho ácido o ácidos nucleicos es al menos una copia de un ácido nucleico que codifica unaARN polimerasa, al menos una copia de un ácido nucleico que codifica una proteína N, al menos una copia de unácido o ácidos nucleicos que codifican una proteína P y al menos una copia de un ADN solapado asociadofuncionalmente con el ácido o ácidos nucleicos que codifican estas al menos ARN polimerasa, nucleoproteína (N) yfosfoproteína (P) o derivados funcionales de los mismos, y en el que dichos derivados funcionales de la ARNpolimerasa y/o nucleoproteína (N) y/o fosfoproteína (P) se definen como variantes de la ARN polimerasa y/o de laproteína N y/o de la proteína P que mantienen actividad de la proteína a partir de la cual se obtienen, como uncomplejo de ribonucleoproteína (complejo RNP), funcional en transcripción y replicación en un genoma de virus, enun sistema de rescate que posibilita la producción de virus de ARN de cadena de sentido negativo no segmentada apartir de ADNc clonado, estando dichas variantes codificadas por un ácido nucleico seleccionado entre el grupo queconsiste en: a) un ácido nucleico que se hibrida en condiciones de alta rigurosidad (solución de prelavado para los filtrosde nitrocelulosa 5X SSC, SDS al 0,5%, EDTA 1,0 mM (pH 8,0), condiciones de hibridación del 50% deformamida, 6X SSC a 42º C y condiciones de lavado a 68º C, 0,2X SSC y el 0,1% de SDS) con un ácidonucleico que codifica la ARN polimerasa de tipo silvestre, la proteína N y la proteína P de una cepa o virusde ARN de cadena de sentido negativo no segmentada; b) un ácido nucleico que presenta al menos el 80%, preferentemente el 90%, más preferentemente el 95%o incluso el 99% de similitud con un ácido nucleico que codifica la ARN polimerasa de tipo silvestre, laproteína N o la proteína P, calculándose dicha similitud a lo largo de la longitud completa de ambassecuencias; y c) un ácido nucleico que difiere del ácido nucleico que codifica la ARN polimerasa de tipo silvestre, laproteína N o la proteína P en al menos un nucleótido, opcionalmente sustitución conservativa,preferentemente 1, 2, 3, 4 o 5 sustituciones, en al menos una supresión o adición de nucleótido,preferentemente 1, 2, 3, 4 o 5 supresiones o adiciones de nucleótido; o siendo un fragmento que representa al menos el 70%, particularmente el 80% y más particularmente el 90% oincluso el 95% de la ARN polimerasa de longitud completa, proteína N o proteína P.
申请公布号 ES2423518(T3) 申请公布日期 2013.09.20
申请号 ES20060292025T 申请日期 2006.12.22
申请人 INSTITUT PASTEUR;CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE;CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE 发明人 TANGY, FREDERIC;CHARNEAU, PIERRE;JACOB, YVES
分类号 C07K14/115;C07K14/005;C07K14/12;C12N7/00;C12N15/86 主分类号 C07K14/115
代理机构 代理人
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