一种卷烟烟气体外细胞毒性测试方法

摘要

一种卷烟烟气体外细胞毒性测试方法，其特征在于：包括以下步骤：1）配制实验试剂；2）细胞接种培养；3）卷烟烟气染毒；4）WST-1染色；5）结果与分析。本发明相比现有技术具有以下特点：在整个试验过程中减少了多次洗涤细胞的试验步骤，操作更为简便；WST-1染色时无需进行更换培养液的步骤，可直接加入稀释培养液进行反应；WST-1产生的甲臜是水溶性的，省去了后续的溶解步骤，WST-1染色后2h内即可完成吸光值检测，相对于以往的测试方法缩短了测试周期，更加快速。本测定方法还具有操作更快速简便、灵敏性更高、结果更稳定的优点，同时此方法可以适用于多种细胞系的烟气细胞毒性测试。

主权项

1.一种卷烟烟气体外细胞毒性测试方法，其特征在于：包括以下步骤：1）配制实验试剂，配制的实验试剂有以下：(1)  生长培养液：RPMI-1640 + 10%胎牛血清 + 2 mM L-谷氨酰胺 + 100 IU/ml青霉素 + 100 μg/ml 链霉素；(2)  样品稀释培养液：RPMI-1640 + 5%胎牛血清 + 2 mM L-谷氨酰胺 + 100 IU/ml青霉素 + 100 μg/ml 链霉素；(3)  WST-1染液：-20 ℃保存，临用前37 ℃温育融化，避免发生沉淀；(4)  阳性对照：十二烷基硫酸钠（SDS）：200 μg/ml，100%细胞致死率浓度；(5)  阴性对照：2%（v/v）二甲基亚砜（DMSO）；2）细胞接种培养，细胞接种培养过程如下：经扩增培养的中国仓鼠卵巢细胞CHO细胞进行消化以后，制备细胞悬液1×10⁵ 个/ml；96孔板的最外周36个孔中每孔加入100 μl生长培养液作为空白对照，其余每孔加入100 μl细胞悬液，于37 ℃、5% CO₂条件下培养24 h；3）卷烟烟气染毒；4）WST-1染色，WST-1染色过程如下：烟气染毒24 h后，每孔加入10 μl经温育的WST-1染液，细胞于37 ℃、5% CO₂条件下孵育2 h，室温下快速振荡1 min，使用酶标仪检测每孔在450 nm波长处的吸光值，参考波长为630 nm；    5）结果与分析如下：原始吸光值A：A = A_450 nm – A_630 nm经过校正的吸光值A_{(经空白校正)}：A_{(经空白校正)} = A – A_(空白)相对吸光值C：C =× 100%相对吸光值代表细胞存活率。