一种可再细胞化的生物瓣瓣膜材料的制备方法

摘要

本发明涉及一种可细胞化生物瓣膜材料的制备方法，其特征在于包括对猪主动脉心脏瓣膜作脱细胞处理，然后用去甲二氢愈创木酸溶液交联，交联后再作后处理。使用交联剂的浓度为0.1-10mg/ml。交联条件是1-40℃下60-360rpm摇动交联2-240小时，取出后浸入D-Hanks液中置于1-6℃条件下后处理3-40天即可获得可细胞化的生物瓣膜材料。通过调节交联剂去甲二氢愈创木酸溶液的浓度、交联的时间和清洗时间等，实现交联的力学强度、抗酶解能力、交联剂释放、促进组织再生能力等方面的可调控。

主权项

一种可细胞化的生物瓣瓣膜材料的制备方法，其特征在于包括对猪主动脉心脏瓣膜作脱细胞处理，然后用去甲二氢愈创木酸溶液交联，交联后再作后处理，具体步骤为：a)将屠宰场采集的新鲜猪主动脉瓣膜，放入1‑6℃、加入双抗的无Ca、Mg的磷酸缓冲D‑Hanks液中，2小时内带回，在4℃下、4小时内剪下瓣膜叶片后，用无菌D‑Hanks液清洗干净；b)将步骤a剪下的瓣膜叶片，放入脱细胞液中，在1‑6℃下以60‑360rpm转速摇动脱除瓣膜细胞，之后将瓣膜用无菌D‑Hanks液清洗干净；c)将步骤b清洗干净的脱细胞瓣膜用DNA酶与RNA酶液在37℃下60‑360rpm摇动降解脱除细胞核成分，再次用无菌D‑Hanks液清洗干净；d)用无菌D‑Hanks液将脱完细胞的瓣膜材料在1‑40℃下、以60‑360rpm转速摇动清洗瓣膜上残留的细胞碎片、游离蛋白质及核酸成分，再次用无菌D‑Hanks液将脱细胞瓣膜清洗干净，得到完全脱细胞的、天然心脏瓣膜材料；e)将步骤d得到的完全脱细胞的天然心脏瓣膜材料浸入0.1‑10mg/ml的NDGA溶液中，在1‑40℃下60‑360rpm摇动交联2‑240小时，取出交联的心脏瓣膜天然材料，用无菌D‑Hanks液清洗干净；f)将交联后的天然心脏瓣膜材料浸入D‑Hanks液中置于1‑6℃下作后处理3‑40天后可得到可细胞化的生物瓣瓣膜材料；所述的D‑Hanks液配方为无Ca、Mg离子的磷酸缓冲液：将0.4g KCl，0.06g KH2PO4，8.00g NaCl，0.35g NaHCO3和0.09g Na2HPO4·7H2O溶解于1L超纯水中；所述的脱细胞溶液是由0.1g胰蛋白酶、0.5g非离子去垢剂聚乙二醇辛基苯基醚、0.5g脱氧胆酸钠和0.02g EDTA溶解于100mL超纯水中配制而成的；所述的DNA酶与RNA酶液配方为：用D‑Hanks液在1‑4℃下配制的20μg/ml的核酸酶和用D‑Hanks液在1‑4℃下配制的0.2mg/ml的脱氧核酸酶(DNase)按1∶1体积比混合；所述的NDGA交联剂溶液配方为：将NDGA用2mL1mol/L的NaOH溶解溶解后，再用D‑Hanks液稀释配制成浓度为0.1‑10mg/mL溶液。