牛结核病PCR快速诊断试剂盒

摘要

本发明公开了一种牛结核病PCR快速诊断试剂盒，它包括800µL浓度为10mg/mL的蛋白酶K，3.2mL裂解液，6mL的TE缓冲液，250µL的PCR酶，170µL超纯水，200µL的MarkerDL2000，20µL浓度为20μM的上引物，20µL浓度为20μM的下引物，40µL阴性对照以及40µL阳性对照。本发明采用常规的PCR方法，对反应条件进行优化，根据牛结核分枝杆菌IS6110的基因片段设计引物，研制了用于检测牛结核病的PCR试剂盒，该试剂盒可以检测牛结核分枝杆菌，适用于牛结核病的检测、诊断和流行病学调查，具有快速、灵敏性高、特异性强等特点。

主权项

一种牛结核病PCR快速诊断试剂盒，其特征在于：它包括800µL浓度为10mg/mL的蛋白酶K，3.2mL裂解液，6mL的TE缓冲液，250µL的PCR酶，170µL超纯水，1mL清洗剂，200µL的Marker DL2000，20µL浓度为20μM的上引物，20µL浓度为20μM的下引物，40µL阴性对照，40µL阳性对照以及20个吸附柱；上引物为5′‑GATGGCGAACTCAAGGAGCACA‑3′，下引物为5′‑ACTGAGATCCCCTATCCGTATGGT‑3′；裂解液为由10mM的Tris‑HCL、1mM的EDTA、2.5M的NaCL以及占裂解液总体积5%的SDS组成的混合溶液；TE缓冲液包括10mM的Tris‑HCL及1mM的EDTA组成的混合溶液，混合溶液的PH值为7.8；PCR酶的组成包括10mM的Tris‑HCL、50mM的KCL、1.5mM的MgCL2 以及0.05U Polymerase/µL ；阴性对照为超纯水；阳性对照为标准牛结核分枝杆菌DNA模板；清洗剂是体积百分比为70%的乙醇；采用吸附柱收集DNA模板。