检测高血压相关的线粒体T5655C突变试剂盒及应用

摘要

本发明提供一种检测原发性高血压相关的线粒体DNAT5655C突变的试剂盒，由DNA提取混合液、PCR混合液、针对T5655C设计的外引物和内引物、限制性内切酶、阳性对照、阴性对照和盒体组成。本发明运用蛋白酶K消化裂解法，从少量的血液标本、带毛囊的毛发、口腔粘膜刮片或唾液等样本中快速提取基因组DNA，解决了传统上从原发性高血压患者血液中提取DNA的问题，减轻被检者的痛苦，实现跨地区传递样本。特异性限制性内切酶形成的不同位点，提高了酶切的特异性，设有分子内控指标，避免出现假阴性结果，提高检测稳定性，检测成本低，检测流程简便、快速，结果判读直观，适于实用。

主权项

一种检测原发性高血压相关的线粒体DNA T5655C突变的试剂盒，其特征在于，该试剂盒由DNA提取混合液（1）、PCR混合液（2）、针对T5655C设计的一对外引物（3）、针对T5655C设计的一对内引物（4）、限制性内切酶(5)、阳性对照（6）、阴性对照（7）和盒体（8）组成，其中，DNA提取混合液（1）由细胞裂解液和溶液Ⅰ组成；扩增T5655C片段的PCR混合液（2）由脱氧单核苷酸、10×PCR缓冲液、MgCl2、三蒸水和Taq酶组成，针对T5655C设计的一对外引物（3）有外前向引物F: CTAACCGGCTTTTTGCCC和外反向引物R: ACCTAGAAGGTTGCCTGGCT；针对T5655C设计的一对内引物（4）有内前向引物F: AAGCCCTAAGTAAGTTGC和内反向引物R: AGCTCCTAGGTGATTTTC；限制性内切酶（5）为限制性内切酶MnlⅠ；阳性对照（6）是含有线粒体序列第5655位点能够发生酶切样本；阴性对照（7）是线粒体序列第5655位点不发生酶切样本；溶液Ⅰ由蛋白酶K、氯仿、苯酚、无水酒精组成。