一种非洲猪瘟病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸条制备方法

摘要

本发明涉及的一种非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体检测胶体金免疫层析试纸条制备方法属于生物工程和动物疫病诊断领域，包括ASFV重组抗原p54表达、纯化、抗体制备、胶体金免疫层试纸条制备及其检测ASFV抗体的灵敏性和特异性。与现有的其他血清学方法相比，用本发明建立的胶体金免疫层析试纸条具有方便、快速、灵敏和特异等优点，能在5分钟内获得明确的诊断结果，并能直接检测可疑猪血清（或抗凝血）的病毒抗体，特别适合现场ASFV血清学诊断、流行病学调查和生猪国际贸易检疫检验。

主权项

一种非洲猪瘟病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸条制备方法，其步骤如下：（1）p54重组抗原表达与纯化：用聚合酶链式反应扩增不包括前50个氨基酸的非洲猪瘟病毒p54基因片段，克隆入原核表达载体pET‑30(a)，用IPTG诱导重组大肠杆菌表达，用亲和层析法纯化重组抗原，用ASFV感染康复猪血清进行免疫学鉴定；（2）p54免疫血清制备：用纯化p54重组抗原与弗氏佐剂混合物反复免疫ASFV抗体阴性猪，用间接ELISA测定免疫血清抗体效价，采集合格免疫猪血清，‑20℃保存；（3）试纸条制备：用胶体金颗粒标记纯化p54重组抗原，以金黄色葡萄球菌A蛋白捕捉标记抗原与病毒抗体复合物作为检测线，以p54免疫血清捕捉未结合至检测线上的胶体金标记的p54抗原作为质量控制线，制备胶体金免疫层析试纸条。