一种提取梨果实蔗糖转化酶及其活性测定方法

摘要

本发明属于植物生理学领域，涉及一种提取梨果实蔗糖转化酶及其活性测定方法。本发明通过在蔗糖转化酶提取过程中增加盐析和透析步骤，常能够将初提取酶液中的糖分和离子等小分子物质除去，从而更能够精确地测定果实中转化酶的活性，为揭示果实内糖分的积累差异提供生理基础，进一步为果实甜度风味品质的改良提供理论依据。

主权项

一种提取梨果实中蔗糖转化酶的方法，其特征在于准确称取梨果肉，放入预冷的研钵中，冰浴下研磨，加入提取缓冲液，充分匀浆后，0～4℃条件下180000～20000g离心30～40min，取上清液，逐渐加入硫酸铵至80%的饱和度，静置20～30min后，0～4℃条件下180000～20000g离心20～30min，去除上清液，加入脱盐缓冲液重新溶解沉淀，再用D27mm透析袋透析脱盐得蔗糖转化酶，所述的提取缓冲液配方为200mmol·L‑1的磷酸钾缓冲液，5mmol·L‑1MgCl2，0.1%β‐巯基乙醇，0.05%Triton‐X100，0.05%BSA，2%PVPP，pH7.5；提取缓冲液与梨果肉的体积质量比是3～10ml：1g；所述的脱盐缓冲液的配方为20mmol·L‑1磷酸钾缓冲液，0.25mmol·L‑1MgCl2，0.01%β‐巯基乙醇，0.05%BSA，pH7.5；脱盐缓冲液与梨果肉的体积质量比是1～5ml：1g；所述的透析使用的透析液为稀释10倍的不含PVPP的提取缓冲液。