一种快捷高通量的体外DNA序列修改方法

摘要

本发明公开了一种体外DNA序列修改方法，该方法通过设计合成针对修改位置的突变引物，该突变引物的一端具有识别位点和酶切位点不重合的限制性内切酶识别序列，用待修改的目标DNA做模板，扩增并酶切，该突变引物包括：保护碱基、酶切识别位点、酶切位点、模板识别退火位点、DNA编辑位点，所述DNA编辑位点位于粘末端位点内或者模板识别退火位点内。本发明与常规PCR点突变法相比更为高效，快捷简单的DNA序列修改方法，此方法不仅适用于DNA的点突变，更适合于更大DNA片段的插入，缺失，修改。实现本方法的策略主要使用PCR扩增，typeIIS限制性内切酶酶切和连接酶连接来实现，该方法简捷，高效，每次可以对DNA上的多个位点同时进行突变。

主权项

一种体外DNA序列修改方法，该方法通过设计合成针对修改位置的突变引物，该突变引物的一端具有识别位点和酶切位点不重合的限制性内切酶识别序列，用待修改的目标DNA做模板，PCR扩增并酶切，连接。