应用RT-PCR检测牙鲆LITAF基因表达的方法

摘要

本发明公开了一种应用RT-PCR检测牙鲆LITAF基因表达的方法。该方法为研究牙鲆LITAF基因表达调控机理和免疫学功能奠定基础。TNF-α在免疫应答和杀灭外来病原菌的过程中起着十分重要的作用，LITAF为TNF-α基因的转录因子，直接调控TNF-α基因的表达。因此LITAF基因的表达丰度在一定程度上反映了牙鲆免疫系统的活度，可作为牙鲆疾病防治中的免疫监测指标和免疫制剂质量评价指标。通过检测牙鲆LITAF基因表达量的变化：可提早判断牙鲆是否染病，及时采取预防治疗措施，避免事态严重发展造成不可挽回的损失；同时可评价鱼类免疫制剂的优劣，判断鲆鱼病害防治中施用何种免疫制剂效果更佳。本发明在mRNA水平对LITAF基因的相对定量分析提供了技术平台。

主权项

一种采用荧光RT‑PCR技术检测牙鲆LITAF基因表达的特异性引物，其特征在于包括符合荧光RT‑PCR反应特点的特异性上下游引物：LITAF‑q‑F：5′‑CGCTGCCAAGTCACTGTTCTC‑3′；LITAF‑q‑R：5′‑CCACATCCTTACAGGCATCCA‑3′ ；以及作为内参照基因的牙鲆β‑actin基因特异性上下游引物：  β‑actin‑F：5′‑AGGTTCCGTTGTCCCG‑3′； β‑actin‑R：5′‑TGGTTCCTCCAGATAGCAC‑3′。