一种发酵法制取埃博霉素B的方法

摘要

本发明提供了一种发酵法制取埃博霉素B的方法：采用亚硝酸-紫外线复合处理纤维堆囊菌(Polyangium cellulosun)ATCC15384获得高产菌株——纤维堆囊菌ABM113，用海藻酸钠和产酶菌株制得固定化菌种；经乙酸乙酯解吸、甲醇复溶后，获得粗品，粗品经Sephadex LH-20柱层析、C18反相色谱柱进一步纯化，得到白色结晶状埃博霉素B，含量≥99.0％。本发明的优点在于：纤维堆囊菌ABM113遗传性能稳定、所制取的埃博霉素B产量高，工艺相对简单，适合于工业化生产。

主权项

一种发酵法制取埃博霉素B的方法，主要包括以下步骤：1)高产菌株筛选：采用亚硝酸‑紫外线复合处理纤维堆囊菌(Polyangium cellulosun)ATCC15384。经亚硝酸处理后紫外灯15cm照射1min后在25～30℃培养箱中避光培养15～20h，进行红霉素抗性筛选和遗传稳定性考察，得到纤维堆囊菌ABM113(CGMCC No.6418)。2)摇瓶发酵：用海藻酸钠和纤维堆囊菌ABM113制得固定化菌种，经逐级放大培养后转种发酵培养基。发酵培养基中加入吸附树脂，灭菌。在一定pH值、接种量、消泡剂、培养基添加方式、添加混合元素的条件下发酵。3)提取纯化：发酵结束后，乙酸乙酯解吸，解吸液蒸去乙酸乙酯，加入甲醇适量复溶，获得粗品。粗品经Sephadex LH‑20柱层析，收集6.5min后的洗脱液。经Sephadex LH‑20分离后的馏分，通过C18反相色谱柱进一步纯化，收集60～80min后的洗脱液，旋转蒸发至干，得到白色结晶状埃博霉素B。