使用可诱导的重组核糖核酸因子生成不含肿瘤的类胚胎干细胞的多能性细胞

摘要

本发明一般而言是关于一种用于培养、生成及筛选不含肿瘤的类胚胎干细胞(ES)的多能性细胞的方法，其使用电穿孔法传送可诱导肿瘤抑制子mir-302因子至哺乳动物细胞内。更具体而言，本发明是关于一种用于生成Tet-On/Off重组转基因的方法及组合物，其在控制人类体细胞/癌症细胞中的强力霉素(Dox)下可表达人工重设的mir-302微型核糖核酸(miRNA)/发夹型RNA(shRNA)因子，因而对这些细胞的分化相关基因及癌基因诱导某些特定的基因沉默效应，进而造成将这些细胞重新编程成类ES多能性状态。

主权项

一种用于将至少一人类细胞重新编程为一不具有肿瘤形成的风险的多能性干细胞的方法，其包含以下步骤：(a)建构一种重组核酸组合物，其能够被传送、转录或加工成至少一种基因沉默效应子，其干扰多个mir‑302所靶向的细胞基因，其中该种基因沉默效应子是选自于mir‑302以及人造重设的mir‑302组成的群组，且该基因沉默效应子的核酸序列是由选自于SEQ.ID.NO.9、SEQ.ID.NO.10、SEQ.ID.NO.11、SEQ.ID.NO.12及SEQ.ID.NO.13所示的核酸序列组成的群组所组成，所述多个mir‑302所靶向的细胞基因之一为CDK2基因；(b)将该重组核酸组合物处理导入一细胞基质；以及(c)诱导该重组核酸组合物表达该种基因沉默效应子，藉以干扰mir‑302所靶向的细胞基因，并将该至少一人类细胞重新编程为一不具有肿瘤形成的风险的多能性干细胞。