纤维蛋白原的制备方法

摘要

本发明提供一种生产过程中溶解速度快，生产周期短，临床使用时复溶快，生物学活性好和临床使用安全性高，且收得率高的纤维蛋白原的制备方法。本发明在上清抗凝血浆加入助剂，本发明相对于现有技术具有如下优点：1、本发明所提供的制造方法，提取效率高。2、本发明所采用的助剂，能提高纤维蛋白原制品的质量，在病毒灭活和冷乙醇沉降过程中起到保护纤维蛋白原以及凝血因子XIII的生物学活性的作用；3、在本发明的工艺过程中，纤维蛋白原的工艺复溶时间缩短为10分钟左右。4、本发明冻干制品的复溶时间为30秒以内，为临床上及时抢救病人的生命赢得了宝贵的时间。

主权项

一种纤维蛋白原的制备方法，依次包括以下几个步骤：（1）向血液中加入抗凝剂；（2）离心分离，取上清抗凝血浆；（3）对步骤（2）所得的上清抗凝血浆加入助剂，再加入磷酸三丁酯和吐温‑80作为病毒灭活剂，进行S/D病毒灭活；所述助剂为葡萄糖、柠檬酸三钠、甘氨酸中的一种或几种,所述助剂的添加浓度为0.1～5.0%w/v;将灭活后的血浆离心分离，弃去沉淀物，取清液；（4）一次沉降：将步骤（3）所得清液预冷至0～4℃，进行离心分离，弃去沉淀物，取清液加入冷乙醇，沉降血浆中的纤维蛋白原，所述冷乙醇的温度为‑20℃；（5）分离并收集步骤（4）中一次沉降得到的纤维蛋白原一次沉淀物，用0～4℃，质量浓度0.3%～0.6%w/v的NaCl水溶液对步骤（4）中一次沉降得到的纤维蛋白原一次沉淀物进行洗涤，弃去洗涤液；（6）一次溶解：对步骤（5）中洗涤后的纤维蛋白原一次沉淀物加入一次溶解剂和助剂，36～38℃水浴加热并搅拌条件下，将步骤（5）收集得到的纤维蛋白原一次沉淀物溶解，去除不溶物，收集一次溶解清液；所述助剂为葡萄糖、柠檬酸三钠、甘氨酸中的一种或几种,所述助剂的添加浓度为0.1～5.0%w/v;（7）二次沉降：将步骤（6）得到的一次溶解清液预冷至0～4℃后，向一次上清液中加入冷乙醇沉降一次溶解清液中的纤维蛋白原，所述冷乙醇的温度为‑20℃；（8）分离并收集步骤（7）中二次沉降得到的纤维蛋白原二次沉淀物，用0～4℃，质量浓度0.3%～0.6%w/v的NaCl水溶液对步骤（7）中二次沉降得到的纤维蛋白原二次沉淀物进行洗涤，弃去洗涤液；（9）二次溶解：对步骤（8）中洗涤后的纤维蛋白原二次沉淀物加 入二次溶解剂，36～38℃水浴加热并搅拌条件下，将纤维蛋白原二次沉淀物溶解，去除不溶物，收集二次溶解清液；所述一次溶解剂与二次溶解剂为含有氯化钠的缓冲液，所述缓冲液的缓冲对为磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠、碳酸钠‑碳酸氢钠或柠檬酸三钠‑柠檬酸;所述一次溶解剂与二次溶解剂的氯化钠浓度为0.2%～3.0%w/v，缓冲对的浓度为0.01mol/L～0.5mol/L，pH值为7.0～7.5;（10）向步骤（9）得到的二次溶解清液中加入冻干保护剂，冻干，得到纤维蛋白原冻干制品。