| 主权项 |
一种用于确定优选固定在固体载体上的多核苷酸的核苷酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：（i）使所述多核苷酸接触至少第一和第二测试探针，所述至少第一和第二测试探针各自包含可以互补于在所述多核苷酸中的一个或多个碱基的部分，以及可选地至少一个测试互补碱基，所述至少一个测试互补碱基各自可以互补于在所述多核苷酸中的碱基，以及当所述测试互补探针的所述测试第一或第二互补部分互补于在所述多核苷酸中的所述一个或多个碱基时，通过所述第一或第二探针与所述多核苷酸的连接，将所述第一或第二测试互补探针共价结合于所述多核苷酸；（ii）加入第一酶，所述第一酶能够除去所述第一测试探针的至少一部分和通过切割反应测序的所述多核苷酸的至少一个碱基，如果所述第一测试探针结合于所述多核苷酸，然后顺次地加入至少第二酶，所述第二酶能够除去所述第二测试探针的至少一部分，如果所述第二测试探针结合于所述多核苷酸，其中每种所述酶是不同的并且对于所述第一或第二探针具有特异性；（iii）可选地，用至少两种不同的测试互补探针和至少两种酶，重复步骤（i）和（ii），其中所述酶可以相同或不同于在步骤（ii）中所用的酶，直到具有互补于所述一个或多个碱基的部分的测试探针已结合于所述多核苷酸，以及可选地测试互补碱基已结合于所述多核苷酸；（iv）通过确定在步骤（i）、（ii）或（iii）期间所述测试互补碱基和/或探针是否结合于所述多核苷酸，确定结合于所述多核苷酸的所述一个或多个碱基的所述测试探针的测试互补碱基和/或互补部分，以确定所述多核苷酸的所述一个或多个碱基；其中进行步骤（i）至（iv）的每个循环一次或多次，以及在每个循环中确定所述序列的一个或多个碱基。 |
